166145. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil kataláz enzimkészitmény előállítására
166145 6 1 órán keresztül kevertetjük. A fel nem oldódott részeket centrifugálással és Hyflo Supercel ágyon való szűréssel távolítjuk el, majd a kristálytiszta szűrlet pH-ját telített káliumhidrogénfoszfát oldattal 5,7-re állítjuk. A kataláz néhány óra alatt kikristályosodik. Néhány napi állás és többszöri kevertetés a kristályosodást tökéletessé teszi. Hozam: 12X106 Bergmeyer egység kataláz. Tartós oldat előállítása céljából a kristályokat kicentrifugáljuk, kevés desztillált vízzel mossuk, 1,8 liter desztillált vízben felszuszpendáljuk, a pH-t 7,5-re állítva 10%-os nátriumhidroxiddal, a kristályokat feloldjuk. Hozzáadunk 0,9 liter glicerint és 0,3 liter 96%-os etilalkoholt és megmérjük az oldat milliliterére vonatkoztatott specifikus kataláz aktivitást. A kapott eredmény alapján 6:3:1 arányú pH = 7,5-ös viz:glicerin:alkohol eleggyel a kívánt specifikus aktivitásúra hígítjuk az oldatot. A kristálytiszta oldat megfelelő pórusméretű azbeszt szűrőlapon vagy membranfilteren nehézség nélkül sterilre szűrhető ós sterilen palackozható. A készítmény fehérjére vonatkoztatott specifikus aktivitása: 3000 Bergmeyer egység/mg fehérje. A készítmény stabil, az oldatból kiválást még egy év elteltével sem tapasztaltunk. 2. példa Mindenben az 1. példa szerint jártunk el, de nyersanyagként 50 kg megtisztított lómájat veszünk, továbbá az első alkoholos kicsapást 80 liter, a másodikat 60 liter alkohollal végezzük. A kristályosítás utáni hozam: 6,5XlO8 Bergmeyer egység. Fehérjére vonatkoztatott specifikus aktivitás 2200 Bergmeyer egység/mg fehérje. 3. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de kristályosítás helyett a második alkoholos kicsapás csapadékát desztillált vízben elszuszpendáljuk, a pH-ját 10%-os nátriumhidroxiddal 7,5-re állítjuk és tartósítás céljából literenként 0,5 g timolt adunk hozzá. így ipari célra felhasználható stabil, de nem steril kataláz szuszpenzióhoz jutunk. Hozam: 14X106 Bergmeyer egység. Specifikus aktivitás: 1100 Bergmeyer egység/mg fehérje. 30 4. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de a kristályos kataláz vizes oldatát 0,5 mólos pH = 7,5-ös foszfátpufferrel olyan töménységűre állítjuk, hogy a víz-glicerin-alkoholos végső oldat pufferkoncentrációja 0,05 mólos legyen. Hozam: 12 X 106 Bergmeyer egység. Specifikus aktivitás: 3000 Bergmeyer egység/mg fehérje. 10 5. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de a kalcium ionok kicsapására 0,85^,liter nátriumhidrogénkarbonát oldatot adunk, amelynek a kon-15 centrációja 144 g NaHC03 literenként. Hozam: 9,5X108 Bergmeyer egység. Specifikus aktivitás: 2900 Bergmeyer egység/mg fehérje. 20 6. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de a kalciumionok kicsapására igen finom eloszlásban széndioxid gázt buborékoltatunk át az oldaton mindaddig, amíg a kivett próba szűrletében kar-25 bonátok hozzáadása zavarodást már nem okoz. Hozam: 9X106 Bergmeyer egység. Specifikus aktivitás: 2900 Bergmeyer egység/mg fehérje. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás stabil kataláz enzimkészítmény előállítására többszöri szerves oldószeres frakcionált kicsapás útján, azzal jellemezve, hogy az oldó-35 szeres kicsapás előtt az oldathoz valamely vízoldható kalciumvegyületet adunk, és a kalciumot az oldatból kicsapjuk, majd az utolsó oldószeres frakcionálásnál kapott fehérjecsapadékot megszárítjuk, vagy adott esetben vízben, glicerinben, 40 vagy ezeket is tartalmazó oldószerelegyekben szuszpendáljuk vagy oldjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a vízoldható kalciumvegyületet 0,05 és 1% közötti, célszerűen 0,05 és 45 0,5% közötti mennyiségben adjuk az oldathoz. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy kicsapószerként széndioxidot, vízoldható karbonátot vagy hidrogénkarbonátot használunk. A kiadványért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.6024/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest — F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 3
