166074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására
11 3-dimetilamino-propionitril, amimóniumperoxidiszulfát. Módszer: 100 mg inzulin R-t 100 ml 8,0 pH^értékű foszfát-*puffer<ben szuszpendálunk és néhány csepp 1 mólos nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával oldunk. A protein-oldatot 100 jul akrilsav-2,3-epoxipropilészterrel elegyítjük és kb. egy órán át +4 C°-on nitrogénatmoszférában keverjük. Ezt követően összekeverjük 2,5 g ákrilamiddial, 0,5 ml 5%-os peroxidiszulfáttal és 0,5 ml 5%-os 3-dimetilaimino-propionitrillel. Az 1—2 óra múlva keletkező polimerizációs blokkot az 1—6. példában ismertetettekkel azonos módon dolgozzuk fel. A hordozón kötött inzulint kvalitatíve teljes hidrolízissel és az aminosavaknak ismert vékonyrétegkromatográfiás technikával ezt követően végzett szétválasztásával igazoltuk. 10. példa: A) a hordozó előállítása: 10 g keményítőt (Merck gyártmányú, típusszám 1252) 150 ml acetonban szuszpendálunk és 100 ml 3%-os nátriumhidroxid-oldattal elegyítünk. Ehhez a szuszpenzióhoz 28 ml allilbromidot (Sohuckhard gyártmányú) adunk és a reakciókeveréket visszafolyató 'hűtő alkalmazása mellett, nitrogénatmoszférában két órán keresztül forraljuk. Lehűlés után a kapott allilkeményítőt acetonnial kicsapjuk, mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 9,2 g. B) az enzim rögzítése: 300 mg acilózt (sertés-vese, fajlagos aktivitása: 20 egység/mg) 20 ml 0,3 mólos 7,5 pH-értékű trisz-(hidroxiimei til)-iaminometánban oldunk, az oldatot 4 C°-nia hűtjük és 200 fú akrilsav-2,3-epoxipropilészterrel 30 percig inkufoáljuk. Ezt az enzim-oldatot 3,5 g akrilamidnak és 1,5 g keményítő-alliléternek 25 ml 0,3 mólos trisz-(hidroxiimetil)Haminoetánnial (pH = 7,5) készített oldatával és 3 ml l°/o^os kobaltkloridoldattal elegyítjük. 3 ml 5%-os ammóniumperoxidiszulfát és 3 ml 5%^os dimetilamino-propianitril hozzáadásával 25 C°-on nitrogénatmoszférában megindítjuk a reakciót. A polimerizátumot az előzőekben ismertetett Á kiadásért felel: a 12 módon dolgozzuk fel. A liofilizált termék fajlagos aktivitása 34 egység/g. 5 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására, azzal jellemezve, hogy a proteint vizes oldatban valamely legalább egy 10 epoxi-csoportot és legalább egy további, a hordozóval kötés létesítésére alkalmas funkciós csoporttal rendelkező, vegyülettel reagáltatjuk, majd az említett funkciós csoportot egy hordozóanyaghoz kapcsoljuk. 15 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a hordozóanyagot ugyanabban a vizes oldatban, monomerek polimerizáció jávai állítjuk elő. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganato-20 sítási >módja, azzal jellemezve, hogy a proteint az epoxivegyülettel polimerizálható monomerek) jelenlétében reagáltatjuk, majd az epoxivegyület-protien-terniék bepolimerizálása mellett végezzük a polimerizáoiót. 25 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a polimerizálható monomer, illetve monomerkeveréket a protein és az epoxivegyület reakciója után adjuk az oldathoz és azután polimerizálunk. 30 5. A 2—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olefinesen telítetlen monomert és további funkciós csoportként egy kopolimerizálható kettőskötést tartalmazó epoxivegyületet alkal-35 mázunk. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy O 40 /\ Rt —(CH 2 )„—CH—CH—R 2 általános képletű epoxivegyületet alkalmazunk, ahol Rí valamely egy vagy több kettőskötést 45 tartalmazó alkenilcsoport, amely adott esetben a kettőskötés mellett legalább egy oxocsoporttal rendelkezik és R2 hidrogénatom vagy valamely rövidszénláncú alkilcsoport. 7. Az 5. vagy 6. igénypont szerinti eljárás 50 foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy monomerként egy akrilsav-, metakrilsav- vagy vinilalkoholszánmazékot vagy ezek keverékét alkalmazzuk. ági és Jogi könyvkiadó igazgatója 6 76.6020/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató
