166040. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készülék fehérjék frakcionálására keményítőgélen történő elektroforézissel

5 166040 6 amely színültig telve van és így a pozitív sarokhoz csatlakozó alsó 9 és a negatív sarokhoz csatlakozó felső 10 érintkezők közötti áramkör zárt. A géltömbök és a szivacs felerősítésének módját a rajzon nem tüntettük fel. 5 A gélfőzéshez hidrolizált burgonyakeményítőt használunk. A puffer törzsoldat 184g tris és 21 g citromsav desztillált vízben oldva és 2000 ml-re feltöltve. Ezt az oldatot használat előtt a 10 tízszeresére hígítjuk. 10 g keményítőt 200 ml-es lombikba mérünk és 15 ml hígított pufferrel hidegen szuszpendáljuk. Másik lombikban ugyancsak hígított pufferből 15 50 ml-t forrásig hevítünk és keverés közben a hideg szuszpenzióhoz töltjük. További 20-30 másodpercig tartó keverés után részben gélesedett, nem ülepedő sűrű tömeget kapunk. A lombik száját alumíniumfóliával lezárjuk és egy előzőleg forrásig 20 hevített autoklávba helyezzük. A forrás kezdetétől 40 percig melegítünk, majd a gőz nagyrészét hirtelen lefúvatjuk. Jobb buborékmentesítést érünk így el, mintha vákuumot alkalmaztunk volna. Lefúvatás után a melegítést még 10 percig foly- 25 tatjuk, majd felnyitás nélkül 30 percig hagyjuk hűlni. Az ismertetett eljárással készült gél homogén, jól reprodukálhatóan készíthető. Az összehasonlító 30 vizsgálatok érdekében fontos, hogy a géltömb is homogén, egyenletes keresztmetszetű és az egymást követő kísérletek során azonos méretű legyen. 35 Tapasztalataink szerint ä 7 géltömb számára a 60-70 mm futtatási hossz, a 6-10 mm vastagság és a 20 mm szélesség a legkedvezőbb. A géltömböket öntőformába való öntéssel 40 állítjuk elő, majd az öntőformából kivett és méretre vágott 7 géltömböt a mintafelvivő állványra helyezzük. A méretre vágott szűrőpapírba itatott 6 mintát a 7 géltömb 5 felületére helyezzük és a hasonlóképpen kivágott, mintegy 45 20 mm magas 4 géltömbbel leszorítjuk, végül a 4—7 tömböt az áramvezető végek szabadon hagyása mellett polietilén fóliába burkoljuk. Az elektroforézis után a 7 géltömböt tovább 50 szeleteljük 1-2 mm vastag lemezekre, amelyeken a kívánt, ismert reakciókat inkubáló oldatok segítségével végezzük. A szeleteléshez szeletelőkészüléket használunk, amelynek kését célszerűen zsilettpengéből, vagy vékony kifeszített huzalokból 55 készítjük. A mintegy 70 mm hosszú, 7 mm széles és 1-2 mm vastag szeleteket az inkubáló edénybe helyezzük. Annak érdekében, hogy minél kisebb 60 mennyiségű inkubáló oldatot kelljen nasználni, a mintát nem tartalmazó géltömb részeket eltávolítjuk és a mintákat erre a célra szerkesztett paraffin inkubáló edénybe helyezzük. Az inkubáló edény alakja a minta-szeletekhez alkalmazkodik. 65 A találmány szerinti eljárás és berendezés előnyei a következőkben foglalhatók össze. A keményítőgél találmány szerinti előállítása homogén és jól reprodukálható tulajdonságú gélt eredményez, a levegő eltávolításává együttjáró baleseti veszély teljes kiküszöbölésével. A gélnek a cellától független öntőmintában való előállítása egyrészt nem foglalja le a cellát s így annak kihasználhatósága ugrásszerűen megnövekszik, másrészt a szeletelés folytán méretei pontosak, felületei egyenletesek és párhuzamosak és végül mivel vékonyabb rétegben alkalmazzuk, különleges hűtési módszer alkalmazása szükségtelenné válik. A paraffinból előállított inkubáló edény lényegesen kevesebb inkubáló oldat alkalmazását igényli. A mintának a gélbe helyezése és közrefogása egyszerű és pontos, hiba lehetősége gyakorlati tapasztalataink szerint nem merülhet fel. A gél alsó vége a pufferoldatban van, a felső végéhez viszkóz szivacs csatlakozik, s így az áramhozzávezetés jó érintkezést biztosít. A művelet 220 V feszültség alatt végezhető. A találmány szerinti kialakítás kis szerkezeti méreteket eredményez, s ezért a művelet a csekély hűtési teljesítményigény és a kis méretek folytán hűtőszekrényben folytatható le. Ugyancsak a találmány szerinti kialakítás eredménye, hogy egyidejűleg pl. 20 különböző minta vizsgálata végezhető és mintánként 3—4 különböző alkotó, vagy kevesebb minta vizsgálata esetén több, pl. 10 különböző alkotó azonosítható. A találmány szerinti módszert a vizsgálatok egyszerűsége, gyorsasága, jó reprodukálhatósága és nem utolsó sorban a nagyszámú parallel elemzés lehetősége teszi alkalmassá rutinvizsgálatok céljára, sőt a lakosság jelentős részére kiterjedő szűrővizsgálatok elvégzésére is. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás fehérjék frakcionálására 1 ata-nál nagyobb nyomáson főzött keményítőgélen történő elektroforézissel, azzal jellemezve, hogy a keményítőgélt az elektroforetizáló cellától független öntőmintába öntjük, az öntőmintából kivett géltömbből a szükséges méretű tömböt kivágjuk, ezt két részre vágjuk, a részek közé a mintát tartalmazó hordozót, előnyösen szűrőpapírt helyezzünk és a tömb részeivel hézagmentesen összeszorítjuk, az így elkészített géltömböt villamos érintkezőt tartalmazó pufferoldat tartályba merítjük, a tömb másik végére ugyancsak villamos érintkezőt tartalmazó puffertartályba merülő nedvszívó testet helyezünk, majd elektromos árammal lefolytatjuk az elektroforézist, ezután a elektroforetizált géltömböt —előnyösen fésűfogszerűen összefogott pengesorral - néhány mm vastag szeletekre vágjuk és a szeleteket - célszerűen paraffinból öntött - inkubáló edénybe, indkubáló oldatba helyezzük. 2. Készülék az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítására, azzal jellemezve, hogy villamos érintkezőt (9) tartalmazó alsó pufferoldattartályba 3