166040. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készülék fehérjék frakcionálására keményítőgélen történő elektroforézissel

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1971. VII. 30. (VA-1364) Közzététel napja: 1974. VII. 27. Megjelent: 1976. IV. 30. 166040 Nemzetközi osztályozás: B 01 k 5/00 í •f

'€i*^ Vadász György oki. vegyészmérnök, dr. Párkány Mihály oki. vegyészmérnök, Budapest Eljárás és készülék fehérjék frakcionálására keményítőgélen történő elektroforézissel 1 A találmány tárgya eljárás fehérjék frakcionálására keményítőgélen történő elektroforézissel, a keményítőnek 1 ata-nál nagyobb nyomáson való főzésével. A fehérje-keverékek szétválasztására több mód- 5 szer ismeretes. Analitikai célokra elterjedten alkalmazzák a hordozós elektroforézist. A legegyszerűbb technikai megoldása a papírelektroforézisnek van, ezért, bár nem biztosít jó elválasztást, rutinvizsgálatokhoz egyre elterjedtebben használják. 10 Az enzimek vizsgálatánál, mint arra Hunter és Markert rámutattak, elengedhetetlenül fontos az izoenzim-összetétel ismerete. Ilyen vizsgálatoknál az elektroforézis befejezése után — amennyiben erre a célra alkalmas reakció rendelkezésre áll — a 15 hordozó anyagot a szétválasztott enzim-frakciókkal olyan oldatba merítik, ahol a vizsgálandó enzim reakciója oldhatatlan, vizuálisan észlelhető végtermékeket szolgáltat. Ilyenkor az enzim esetleges diffúziója, amennyiben ez a nem kellően megvá- 20 lasztott hordozón belül történik, lerontja az elválasztást, ha pedig oldatba megy, úgy az oldhatóbb, vagy kisebb mennyiségben is jelen levő frakciók kimutatása bizonytalanná, esetleg lehetetlenné válik. 25 Izoenzim-spektrum meghatározására az ismert eljárások közül elsősorban a gélelektroforézis bizonyult alkalmasnak. Néhány technikai nehézségtől eltekintve a „Keményítő Gél Elektroforézis" (KGE) ezek között is igen előkelő helyet foglal el 30 (Dévényi, Gergely: Aminosavak, peptidek, fehérjék. Bp. 1963. p. 36., Backhausz: Immundiffúziós és immunelektroforézises módszerek. Bp. 1968. p. 13), amelyet a Smithies (Mature, 175: 307, 1955., Biochem. J., 71: 585, 1959.) alapvető közleményeit követő és értékes eredményeket tartalmazó cikkek egyre növekvő száma is bizonyít [Moretti és társai: Bull. Soc. Chim. Biol., 39:593, 1957 és 40:59, 1958., Vesselinovitsch:. Nature,' 182:665, 1958, Cunningham, Magnusson, Johus: J. Chromatog. 5:90, 91, 1961, Mauray és társai: Bull. Soc. Chim. Biol., 43:993, 1961, Bocci: Nature, 197:491, 1963. és J. Chromatog., 11:515, 1964, Deanis: J. Chromatog., 10:450, 1963.]. A KGE eredménye, hogy az elektroforetikus elválasztást kombinálja a molekula-méret szerinti elválasztással. Nem kevés munka foglalkozik a KGE technikájának javításával, s így egyre pontosabb eredmények és érzékenyebb elválasztások válnak lehetővé [Gordon A. H.: Electrophoresis of proteins in Polyacrylamide and Starch gels. North-Holland, 1969.]. A keményítőgélen végzett elektroforézisnek az acrylamidgéllel végzett elektroforézissel szembeni előnye az előállítás egyszerűsége és olcsósága, mert keményítőn kívül csak pufferoldatra van szükség és végül, hogy nem mérgező. Az orvosi kutatás számos betegség (pl. szívbetegségek, daganatos betegségek stb.) megállapításait dolgozta ki a keményítőgél elektroforézis segítségével. 166040