165986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag hatásos, új leurozin származéok és sóik előállítására
5 165986 6 A szárazmaradékot 60 ml benzolban oldjuk, majd 500 g IV—V aktivitású alumíniumoxidból benzollal kiképzett 35 mm átmérőjű kromatografáló oszlopra öntjük. Az eluálást sorrendben az I. táblázatban feltüntetett oldószerekkel végezzük: I. táblázat Eluálószer összetétele mennyisége ml benzol 900 9 :1 arányú benzol-kloroform-elegy 1800 8,5 :1,5 arányú benzoi-kloroform-elegy 1000 8 : 2 arányú benzol-kloroform-elegy 2800 1 :1 arányú benzol-kloroform-elegy 2800 kloroform 800 • 400 ml-es frakciókat fogunk fel. Az egyes frakciókat vékonyrétegkromatográfiás módszerrel vizsgáljuk [FARNSWORTH, N. R. et alii: Uoydia, 27, 302 (1964)]. Az 1-5. frakció alkaloidot nem tartalmaz. Általában a 6. frakcióban jelenik meg az első" alkaloid-nyom, amely zömmel reagálatlan leurozint tartalmaz. Kb. a 7. frakcióban jelenik meg az N-dezmetil-leurozin, amelynek eluálása kb. a 15. frakcióig tart. Az N-forniil-leurozin leoldódása kb. a 13. frakciónál indul meg és általában a 19-21. frakciónál fejeződik be. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján az azonos alkaloidokat tartalmazó frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk. 5,6 g nyers, amorf N-formil-leurozint és 1,5 g nyers, amorf N-dezmetil-leurozint kapunk. A nyers, amorf bázisokból ezután külön-külön mono-szulfát-sót képzünk, oly módon, hogy 1 súlyrész terméket 5 térfogatrész vízmentes etanolban oldunk, majd annyi 1% kénsavat tartalmazó vízmentes etanolt adunk az oldathoz, hogy annak kémhatása pH = 4 legyen. A kristályos szulfát-sók kiválása azonnal megindul. Az elegyet néhány órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a kivált kristályokat leszűrjük. A külön-külön kapott szulfát-sókat ezután a következő módon kristályosítjuk át: 1 súlyrész kristályos szulfát-sót 5 térfogatrész metanolban oldunk és vízmentes etanollal ötszörös térfogatra hígítjuk. Az oldatokat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a kivált átkristályosított termékeket szűrjük, vízmentes etanollal mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 4,8 g N-formií-leurozin-monoszulfát (40,1%), op.: 248-252 0° (Boetius), MPo = +37° (c = 1, víz) és 1,1 g N-dezmetil-leurozin-monoszulfát (9,3%), op.: bomlik, 210C°-tól. [a]?o=3,2° (c = l, víz). Az N-formÜ-leurozin-bázis fizikai állandóinak megállapítására az N-formil-leurozin-monoszulfát egy részét vízben oldjuk, ezután tömény ammóniumhidroxid-oídattal pH = 8-9-ig értékig meg-5 lúgosítjuk, majd 3 x metilénkloriddal kivonatoljuk. Az N-formil-leurozint bázisként tartalmazó, egyesített majd vízmentesített szerves fázist csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk, fly módon amorf 10 N-formil-leurozint kapunk, amelyet metanolból átkristályosítunk. A kristályos N-formil-leurozin fizikai állandói: op.: 209—211 C° (Boetius), [á$o = +80,3° (c = 1, kloroform). 15 Az N-formil-leurozin ÍR spektruma (2. ábra) abban különbözik a leurozinétől, hogy az 1 672 cm-1 hullámhossznál a formilgyök erőteljes abszorpciós sávja jelentkezik. 20 Az N-formil-leurozin tömegspektruma alapján a molekula-ion tömegszáma 822. A mért tömeg: M = 822,3977. Az ebből számított összegképlet: C46H54N4O10, melynek számított tömege: 822,3909. 25 Elemanalízis: (C46 H S 4N 4 Oio összegképletre) számított C = 67,15%, H = 6,61%, N = 6,81%, O = 19,43%, 30 talált C = 66,95%, H = 6,58%, N = 6,75%, O = 19,27%. A molekulaionból formilcsoport-vesztéssel a 35 793-as tömegszámú ioncsúcs keletkezik, mint azt a tömegmérés útján igazoltuk: ni/emért = 793,3866. 40 E tÖEiegszámnak C4 5 H S3 N 4 09 összegképlet felel meg, meiyből ^«ámított = 793,3882. 45 A leurozin-bázis tömegspektrumához hasonlóan az N-formil-leurozin-bázisnál is észleltük a 353 tömegszámnak megfelelő ion-csúcsot, amely az epoxi-velbanamin-résznek felel meg. Ezt pontos tömegmérés szintén igazolta: 50 m/emért = 353,1874, mely tömegszámnak C2 iH2 5N 2 0 3 összegképlet felel meg, melyből 55 "^számított = 353,1858. Az N-dezmetil-leurozin-bázis fizikai állandóinak megállapítására az N-dezmetil-leurozin-monoszul-60 fátot vízben oldjuk, az oldatot ammóniumhidroxiddal pH = 8-9 értékig meglúgosítjuk és a felszabadult bázist metilénkloriddal kivonatoljuk, az elkülönített és víztelenített szerves fázis szárazrapárlása útján kinyerjük az amorf alkaloidbázist, 65 melyet metanolból átkristályosítunk. 3
