165888. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a reagens kreatinkináz meghatározásához
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1974. I. 18. (BO-1479) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1973.1. 19. (P 23 02 721.6) Közzététel napja: 1974. VII. 27. Megjelent: 1976. II. 28. 165888 Nemzetközi osztályozás: G 01 n 33/16 Feltalálók: Bernt Erich gyógyszerész, München, Dollacker Werner, vegyészlaboráns, Weilheim/Obb. dr. Gruber Wolfgang vegyész, Garatshausen, dr. Bergmeyer Hans Ulrich vegyész, Tutzing/Obb. Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GMBH, Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás és reagens kreatinkináz meghatározásához 1 A találmány tárgya tökéletesített eljárás kreatinkináz meghatározására és reagens az eljárás végrehajtásához. Különböző betegségeknél a testnedvek, például a szérum kreatinkináz-aktivitása jellegzetes változáso- 5 kat mutat. Ezért a kreatinkináz meghatározása úgy e betegségek felismerése, mint kutatási célok szempontjából nagy jelentőségű. (A leírásban és az igénypontokban használt 10 rövidítések jelentése: AMP = adenozin-monofoszfát ADP = adenozin-difoszfát ATP = adenozin-trifoszfát NADP = nikotinsavamid-adenin-dinukleotid-foszfát G6P = glükóz-6-foszfát G6P-DH = glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz 6—PG = 6-foszfoglükonsav). A kreatinkináz katalizálja az (1) reakciót: (1) Kreatin-foszfát+ADP- kreatin+ATP 15 Különböző eljárások ismeretesek, amelyekben a kreatinkinázt az (1) egyenlet szerinti reakcióban részt vevő egyik vegyület mennyiségi változásának mérése útján határozzák meg. Ezek közül mindenek előtt azok az eljárások tettek szert jelentőségre, melyek a felső nyíl irányában lefolyó reakciót használják fel és kreatint [Rottheauwe és munkatársai, Klin. Wschr. 39, 1269 (1961)] vagy ATP-t [I. T. Oliver, J. Biol. Chem. 61, 116 (1955)] mérnek. Az enzimaktivitást előnyösen a képződő ATP meghatározásával mérjük. Ez ismert módon történik [I. T. Oliver, J. Biol. Chem. 61, 116 (1955)] glükózzal való reakció útján, melyet hexokináz katalizál: (2) ATP+glükóz ^ ADP+glükóz-6-foszfát A glükóz-6-foszfát NADP-vel és G6P-DH-val könnyen glükonát-6-foszfáttá alakítható át. Ekkor a NADP NADPH-vá redukálódik, amely a 340 nm hullámhosszúságú fényt erősen abszorbeálja: (3) NADP+ +G6P^NADPH+6-PG+H + Ezért a kreatinkináz-aktivitás könnyen meghatározható a NADPH-képződés sebességének a mérése 30 útján. 20 25 165888
