165659. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kanamycin származékok előállítására
19 5 órán át hidrogénezzük, majd hozzáadunk további 0,1 g 10% palládiumot tartalmazó aktív szenet és 10 ml vizet. A hidrogénezést éjszakán át folytatjuk. A reakcióelegyet szűrjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot 5 50 ml vízben feloldjuk és CG—50 típusú oszlopon (NH+ 4 típusú), l,2cmX50cm méretű) kromatografáljuk. Az oszlopot 200 ml vízzel mossuk, majd 500 ml 0,11 n ammóniumhidroxi-oldattal, 500 ml 0,2 n ammóniumhidroxi-oldattal, 900 ml 0,5 n 10 ammóniumhidroxi-oldattal és 500 ml n ammóniumhidroxi-oldattal eluáljuk. Az eluátumot 10 ml térfogatú frakciók alakjában gyűjtjük össze. A kanamycin B-t a 60—76. frakciókból nyerjük ki 32%-os kitermeléssel (459 mg). A 128-138. 15 frakciókat összegyűjtjük, csökkentett nyomáson bepároljuk. így 318 mg (karbobenzoxikanamycin B-re számítva 17%) BB-K26 terméket kapunk, olvadáspont: 186-187 C° (bomlás), [aß 0 =+78° (c=l,15, vízben). IR-spektrum: PQ=0: 1640 cm" 1. 20 Elemzési eredmények C22 H4 4 N 6 Oi 2 • H2 C0 3 -ra vonatkoztatva: számított: C 42,72%, H 7,17%, N 13,00%, 25 talált: C 42,23%, H 7,19%, N 12,37%. Vékonyrétegkromatográfiás eredmények (szilikagél F254, ninhidrin): Rf = 0,ll 30 (aceton-ecetsav-víz 20 : 6 : 74 rendszerben), Rf = 0,19 (kloroform-metanol-koncentrált ammóniumhidroxid-víz 1 :4 :2 :1 rendszerben). A 201-222. frakciókat egyesítjük, csökkentett 35 nyomáson bepároljuk és fagyasztva szárítjuk. így 209 mg (12%) BB-K27 jelzésű másik aktív komponenst kapunk, amelynek olvadáspontja: 183-184 C° (bomlás), IR-spektrum: ^c=o: 1750 cm"1 . 40 Elemzési eredmények C22 H 4 4N 6 Oi 2 *H 2 C0 3 -ra vonatkoztatva: számított: C 42,72%, H 7,17%, N 13,00%, 45 talált: C 42,25%, H 6,93%, N 12,18%. Vékonyrétegkromatográfiás eredmények (szilikagél F254): Rf=0,15 50 (aceton-ecetsav-víz) 20 : 6 : 74 rendszerben), Rf = 0,07 (kloroform-metanol-koncentrált ammóniumhidroxid-víz 1 :4 : 2 :1 rendszerben). 55 11. példa L-(—)-7-Amino-a-hidroxivajsav előállítása DL-?hidroxí-7-ftálimidovajsavból 60 A) Dehidroabietilammónium-L-a-hidroxi-7-ftál-imidobutirát 25 g (0,1 mól) 2-hidroxir-7-ftálimidovajsav (Saito és munkatársai, Tetrahedron Letters, 1970, 4863) 200ml etanollal készített oldatához hoz 65 20 záadjuk 29 g (0,1 mól) dehidroabietilamin 130 ml etanollal készített oldatát. Az oldatot egy percen át erősen rázzuk, majd 5 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk, ezalatt finom tűk kristályosodnak ki. A kristályokat szűréssel összegyűjtjük, 50 ml etanollal mossuk és levegőn szárítjuk. így 30,1 g (56%) diasztereomer dehidroabietilamin-sót kapunk. Olvadáspont: 93-94 C°, ["]r>4 =15° (c = 2,5, metanolban). 300 ml etanolból átkristályosítva 23,2 g (43%) tiszta terméket kapunk. Olvadáspont: 94-95 C°, [aß4 =-10,8° (c = 2,5, metanolban). További átkristályosítás nem változtatta meg az olvadáspontot és a forgatóképességet. Elemzési eredmények C32 H4 2 N 2 O s • H 2 0-ra vonatkoztatva: számított: C 69,54%, H 8,02%, N 5,07%, talált: C 69,58%, H 8,08%, N 5,07%. B) L-(—)-7-Amino-a-hidroxivajsav 1,5 g (0,014 mól) nátriumkarbonát 40 ml vízzel készített oldatához hozzáadunk 5,3 g (0,01 mól) dihidroabietilammónium-L-a-hidroxi-7-ftálimidobutirátot és 60 ml étert. Az elegyet erősen rázzuk, amíg a szilárd anyag fel nem oldódik. Az éteres fázist elválasztjuk. A vizes oldatot kétszer 20 ml éterrel mossuk és csökkentett nyomáson 15 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz 10 ml tömény sósavat adunk és az elegyet 10 órán keresztül visszafolyató hűtő alkalmazásával forraljuk. Lehűlés után a kivált ftálsavat szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot feloldjuk 10 ml vízzel és az oldatot szárazra pároljuk. Ezt a műveletet kétszer megismételjük, hogy eltávolítsuk a sósav feleslegét. A visszamaradó szirupszerű anyagot 10 ml vízben feloldjuk és a kismennyiségű oldhatatlan ftálsavat kiszűrjük. A szűrletet IR—120 jelzésű oszlopon (H* ciklusú, 1 cmX35 cm méretű) adszorbeáljuk, az oszlopot 300 ml vízzel mossuk és n ammóniumhidroxid* oldattal eluáljuk. Az eluátumot 15 ml térfogatú frakciók alakjában összegyűjtjük. A ninhidrinnel szemben pozitív reakciót adó 10—16. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk, így olyan szirupszerű anyagot kapunk, amely fokozatosan kristályosodik. A kristályokat etanollal eldörzsöljük, szűrjük és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 0,78 g (66%) L-(—)-7-amino-a-hidroxivajsavat kapunk, amelynek olvadáspontja: 206-207 C°, [aß 4 =-29° (c = 2,5, vízben). A termék IR-spektruma azonos az ambutirozinból kapott hiteles minta spektrumával. 12. példa l-(L-)-(-7-Amino-a-hidroxibutiril)-kanamycin A vagy B monoszulfátsójának előállítása 1 mól l-ÍL-H-y-aniino-a-hidroxibutiril)kanamycin A-t vagy B-t feloldunk 1-3 liter vízben. Az oldatot az oldhatatlan szilárd anyagok eltávolítása céljából leszűrjük. A lehűtött és 10
