165579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-( D-5-amino-5-karboxi-vleramido) -3- (karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav antibiotikum előállítására

11 165579 12 lyeket a vizsgálati mikroorganizmussal, Vibrio percolans-szal (ATCC8461) előzőleg beoltottunk. -Ugyancsak Petri-csészékre helyezünk olyan korongokat, amelyeket előzőleg ismert koncentrációjú 842 A-t tartalmazó szabvány oldatba merítettünk. 5 A korongokat egy éjszakán át 28 C° hőmérsékleten inkubáljuk, majd feljegyezzük a gátlása zónák átmérőit. A 842 A és a fermentlé koncentrációját az ismert koncentrációjú szabványos 842 A oldatok zónaátmérőjére vonatkozó 10 szabványos görbe interpolálásával számítjuk ki. Ezzel az eljárással megállapítható, hogy a Streptomyces lactamdurans (NRRL3802) átlagban 80,4 fig/ml 7-[D-5-amino-5-karboxivaleramido(-3-)karbamoiloximetil]-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsavat 15 termel az alap termelőközegben. D-lépés: Glicin adagolása 20 Kísérlet AII. közeghez adott glicin % Antibiotikum termelés Mg/ml %-os hozamnövekedés a kontrollhoz képest Kontroll 1 2 Kontroll 1 2 Kontroll 1 2 3 0,01 0,10 0,05 0,10 0,075 0,100 0,125 77 84 97 76 106 93 88 113 113 98 10% 26% 41% 22% 28% 28% 11% 40 45 50 55 60 Az elvégzett kísérletek alapján 0,05% glicin termelőközeghez adását ítéljük a leghatékonyabbnak a 7-[D-5-ammo-5-karboxivaleranúdo(-3-)karbamofloximetÜ]-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav hozamának növelésében. 65 2. példa Antibiotikum termelése: L-felnilalanin adagolása Az 1. példában leírt eljárást megismételjük azzal az eltéréssel, hogy L-fenilalanin különböző koncentrációit adjuk glicin-adalék helyett a D-lépésben. A következő táblázatban az L-fenilalanin alkalmazott koncentrációit és az I. képletű antibiotikum ennek tulajdonítható hozamnövekedését tüntetjük fel. II. táblázat Glicin hozzáadása az előbbi II. közeghez a C-lépésben, jelentősen növeli a 7-[D-5-amino-5-karboxivalerarniclo(-3-)karbamoiloxirnetil]-7-rnetoxi-3-cefém-4-karbonsav hozamát. Az I. táblázatban bemutatjuk e hozamnövekedés mértékét külön- 25 böző koncentrációk alkalmazása esetén. A táblázatban látható adatok három külön vizsgálatsorozatból származnak. A vizsgálatokban a kontrollt az selőhbiekben az A-C-lépésben leírtak szerint végezzük, és a többi kísérletet is azonos 30 módon hajtjuk végre azzal az eltéréssel, hogy a jelzett mennyiségű glicint adjuk hozzá. A vizsgálatokat a C-lépésben leírtakkal azonos módon végezzük. 35 I. táblázat AII. közeghez adagolt L-fenilalanin^ Antibio%-os hozamnöKísérlet AII. közeghez adagolt L-fenilalanin^ tikum termelés jug/ml vekedés a kontrollhoz képest Kontroll _ 76 _ 1 0,05 82 v8% 2 0,1 77 1% 3 0,3 90 34% Kontroll 85 1 0,1 100 18% 3. példa Antibiotikum termelés: L-fenilalanin és glicin adagolás Az 1. példában leírt eljárást megismételjük azzal az eltéréssel, hogy Lfenilalanint adagolunk 0,05% glicint tartalmazó alap-termelőközeghez. E közeg, melyet HL közegnek jelölünk, a következő összetételű: III. közeg: Desztillációs maradék 3,0% Eredeti szárított élesztő NF 0,75% Mobü Par-S habzásgátló (Mobil Ofl Company, New York) 0,25% Glicin 0,05% A következő táblázatban az Lfenilalanin alkalmazott koncentrációit és az I. képletű antibiotikum ennek kedését tüntetjük fel. tulajdonítható hozamnöve-III. táblázat Kísérlet III. közeghez adagolt L-fenilalanin^ Antibiotikum termelés Mg/ml %-os hozamnövekedés a kontrollhoz képest Kontroll 1 Kontroll 1 Kontroll 1 0,1 0,3 0,3 101 124 103 118 110 121 23% 15% 10% 6