165546. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás egy dekapeptidamid előállítására
165546 10 dalunk 6,62 g (20 mmol) prolin-p-nitrobenzilészter-hidrobromidot, majd keverés és hűtés köziben hozzáadunk 2,22 ml (20 mmól) N-metil-morfolint. Az oldatokat —20°-on egyesítjük, majd 3 órán át hűtés mellett keverjük, és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált sókat szűrjük, és a dimetilformamidos oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, és 1 n citromsavval, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-jkarbo'náttal és vízzel mossuk, majd szárítás után bepároljuk. A maradékot éterrel hidegen eldörzsöljük, a csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. Így 8,25 g (75%) védett dipeptidésztert kapunk. Op.: 78—82°; R5/= 0,75—0,85. 2. lépés: H-Ar@(N02 )-Pro-ONB-HCl 7,0 g (12,6 mmól) védett dipeptidésztert (2. példa, 1. lépés) feloldunk .200 ml etilacetátban, és hűtés közben a csapadékkiválás 'megszűntéig száraz sósavgázt vezetünk be. A szuszpenzióról az etilacetátot vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. így 6,1 g (99%) dipeptidészter-ihidrokloridot kapunk. Op.: 68—'70°; R2 /= = 0,35—0,45. 3. lépés: Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-ONB 7,25 g (16 mmól) karbobenzoxi-leucin-diciklohexil-ammónium-sóból 50 ml dimetilformamidban 0,18 ml (1,62 mmól) N-metil-morfolin és 2,14 ml (16,2 mmól) klórszénsav-i-butilészter segítségével —10o -on vegyes anhidridet készítünk. 6,6 g i(13,5 numól) dipeptidészter-hidrokloridot i(2. példa, 2. lépés) feloldunk 50 ml dimetilformamidban, majd keverés és hűtés közben hozzáadunk 1,5 ml (13,5 mmól) N-metil-morfolint. A dimetilformamidos oldatokat —10°-on egyesítjük, majd 3 órán át keverjük és éjszakán át állni hagyjuk. A kivált sókat kiszűrjük, és a dimetilformamidos oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és 1 n citromsavval, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal és ismét vízzel mossuk, majd szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. így 9,85 g (88%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 88—92°; R5 /= 0,5— 0,6. 4. lépés: Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-OH 6,5 g (9,3 mmól) védett tripeptidésztert (2. példa, 3. lépés) feloldunk 30 ml metanolban, és keverés közben kis részletekben (fenolftalein indikátor jelenlétében) hozzáadunk 9,3 ml 1 n nátrium-hidroxidot. A reakcióelegyhez 9,3 ml 1 n sósavat adunk, és a metanolt vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot 5%-os nátrium-*hidrogén-karbonát-oldattal hígítjuk, a vizes oldatot etilacetáttal mossuk, majd 2-es pH-ra savanyítjuk. Az emulziót etilacetáttal kirázzuk, és az etilacetátos oldatokat egyesítjük, majd bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. így 4,0 g (76,5%) védett tripeptidet kapunk. Op.: 93—98°; R3 / = 0,4— 0,5; R9 /= 0,65—0,75. 5. lépés: Z-Leu-Arg(N02)-Pro-Gly-NH 2 10 ml dimetilformamidban feloldunk 5,75 g (10 mmól) védett tripeptidet (2. példa, 4. lépés) és 1,11 ml (10 mmól) N-metil-morfolint, majd —10°-on 1,35 ml (10 mmól) klórszénsavetilésztert adunk hozzá. A reakcióelegyet 10 percig keverjük, majd hozzáadjuk 1,35 g (10 mmól) glicinamid-aeetát és 1,11 ml ((10 mmól) N-metil-morfolin 50 ml dimetilformamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet egy órán át hűtés mellett keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. Az oldatot bepároljuk, és a maradékot feloldjuk 80 ml etilaeetát és 20 ml butanol elegyesben. A kapott oldatot 1 n sósavval, vízzel, 5%os nátrium^hidrogén-nkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd az organikus fázist .bepároljuk és éterrel eldörzsöljük. Így 5,9 g (94%) védett tetrapeptidésztert kapunk. 6. lépés: H-Leu-A;rg(N02 )-Pro-Gly-NH 2 • HOPCP 1,25 g (2 mmól) védett tetrapeptidamidot (2. példa, 5. lépés) az 1. példa 4. lépésében leírt módon dekarbo'benzilezünk anizol jelenlétében trifluor ecetsavval, majd pent aki órfenoláttá alakítjuk, így 1,3 g (91!%) terméket kapunk. Op.: 164—165°. A 6. lépésben előállított nitro-tetrapeptidamid-pentaklórfenolátot az 1. példa 12. és 13. lépésében leírt módon alakítjuk a kívánt dekapeptidamiddá: R1 /*= 0,02—0,10; R 8 / = 0,35— 0,45; EHís 6 ,5 = 0,9. 3. példa: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 • H2 S0 4 1,23 g {1 mmól) dekapeptidamid-származékot (1. példa, 12. lépés) feloldunk 10 ml 2 n sósavban (vagy 2 n kénsavban), majd keverés és hűtés közben hozzáadunk 0,4 g cink-port. A keverést 30° alatti hőmérsékleten folytatjuk két órán át. Az elreagálatlan cinket kiszűrjük és az oldatot átfolyatjuk kb. 50 ml acetát-ciklusú Amberlite IR 4B (Rohm and Hass Co., Philadelphia, USA.) ioncserélő gyantából készült oszlopon. A gyantát vízzel semlegesre mossuk, majd a vizes oldatokat egyesítés után kb. 10 ml-re töményítjük csökkentett nyomáson. Az oldatba kénhidrogén gázt vezetünk. A keletkezett cinkszulfidot tartalmazó szuszpenziót centrifugáljuk. A felülúszót elválasztjuk, majd a csapadékot még kétszer mossuk vízzel. A vizes oldatokat egyesítjük és csökkentett nyomáson kb. 5 ml-re töményítjük, majd acetonnal hígítjuk. A kicsapott anyagot kiszűrjük, acetonnal mossuk és 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
