165545. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a l3béta-rövidszénláncú alkil- 3-metoxi- 8,14-szeko-gona-1,3,5(10),9(11)- tetraén- 14béta-hidroxi- 17-ketonok előállítására
165545 3 4 tilag egységes, optikailag aktív 14R/?-hidroxi-17~ -keton-származék. A folyamatra jellemző,, hogy a 17S/?-aeiloxi csoport dezacileződik, majd a képződő S-alkohol oxidálódik, míg az R-alkohol változatlanul marad. A találmány értelmében úgy -állítunk elő I általános képletű vegyületeket, — ahol az Y metil- vagy etil-csoportot jelent —, hogy a II általános képletű vegyületeket — ahol az Y metil- vagy etil-csoportot, az X pedig acetilvagy propionil-csoportot jelent — vagy a legalább '90%-ban a II általános képletű vegyületeket — ahol az Y metil- vagy etil-csoportot, az X pedig acetil- vagy propionil-csoportot jelent — és legfeljebb 10%-ban a III általános képletű vegyületeket — ahol az Y metil- vagy etil-csoportot, az X pedig acetil- vagy propionilcsoportot jelent — tartalmazó keveréket Mycobacterium phlei törzs i(MNG 29) vagy egy Nocardia species (MNG 67) törzs tenyészetével fermentáljuk, majd a képződő I általános képletű vegyületeket — alhol az Y metil- vagy etilcsoportot jelent — elkülönítjük. A monoacil-dihidroxi-szárma^ékok dezacilezésére és sztereospecifikus oxidációjára a baktériumok között találtunk megfelelő törzseket. Különösen alkalmasnak bizonyult egy Mycobakterium phlei törzs (MNG 29) és egy Nocardia sp. (MNG 67). Átalakításra alkalmas tenyészetük a burgonyás ferdeagar táptalajon növesztett 6—10 napos tenyészetükkel oltott táptalaj 1—3 napos további inkubációjával állítható elő. Az átalakítandó vegyületet előnyösen etanolban oldva adagoljuk a tenyészethez. Az átalakításokat aerob körülmények között végezzük. Időnként vékonyrétegkromatográfiás analízissel követjük a folyamatot. A szubsztrátum rendszerint teljes átalakulása után a fermentációs folyadékot vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, előnyösen metilizobutilketonnal vagy toluollal extraháljuk. Az extraktum derítése,, bepárlása, a nyers termék szenezése után az oxidáció terméke kristályos állapotban kinyerhető. Az R,S-típusú ^R^nSj^-dihidroxi-nS^-acilát-származékok oxidációs terméke minden esetben a már ismert 17S:/?-hid;roxi-14-keton enantiomerje, amely az ellentétes irányú, de azonos abszolút értékű optikai forgatóképesség mellett az egyéb állandók azonosságával jellemezhető. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa: 13/?-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-14R,?-ol-17-on előállítása a) Nocardia sp. <MNG 67) burgonyás ferdeagar táptalajon kinőtt 10 napos tenyészetét 5 ml 0,4%-os nátriumklorid-oldatban szuszpendáljuk és 3 literes Erlenmeyer-lombikban 1 liter táptalajt oltunk. A táptalaj. összetétele: ' kukoricalekvár 15 g élesztőkivonat (nedves súly) 60 g dinátriumhidrogénfoszfát 4,5 g káliumdihidrogénfoszfát 3,4 g 5 1 l-re töltve csapvízzel. pH a sterilezés előtt 6,3. A beoltott tenyészetet 28 C°-on 48 órán át inkubáljuk malomszita rázógépen (percenként 300 fordulat, 2,5 cm kitérés). 10 1 kinőtt tenyé-10 szethez, miután a pH-t 7,8-ra állítottuk, literenként 1 g 13|/?-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l^.SílOJ^ÍllJ-tetraén-liéRi^.lTS^-diol-nS^-acetát és 13;/?Jmetil-3-metoxi-8,14~szeko-gona-l,3,5-(10),9<ll)-tetraén-14S(a,17S^-diol-17Sy3-acetát 9:1 15 arányú keveréket adagolunk 10 ml etanolban oldva. A szubsztrátum átalakulását vékonyré• tegkromatográfiával követjük. Kvantitatív átalakulás után a fermentációs folyadékot szűrjük, a szürletet kétszer 2 1 metilizabutilketon-20 nal kivonatoljuk. A sejtet kétszer .2 1 acetonban áztatjuk 12—1,2 óráig. Az acetonos oldatot kis térfogatra bepároljuk és a vizes maradékot kétszer 200 ml metilizobutilketonnal kivonatoljuk. Az organikus kivonatokat egyesítés után vá-23 kuumban szárazra pároljuk, 500 ml acetonban 10 g semleges alumíniumoxiddal, majd 1 g szénnel derítjük és vákuumban szárazra pároljuk. Éterből 5,25 g 13í/?-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-14R/?-ol-17-on 30 nyerhető ki. Acetonból átkristályosítva op.: 112—114 C°; (Ö)25D =-|H38° (c = 1, dioxán); kmax = 265 nm, £ = 20 600. Elemanalízis CigH2403-ra (300,4) vonatkoztat-35 Va: számított: C 75,96% H 8,05%; talált: C 75,'90% H 8,09%. 4Q b) 2,0 g 13/?-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9i(ll)-tetraén-14R/ 3,17S^-diol-17S / S-acetátot az la) példa szerinti módon alakítunk át. A fermentációs folyadékot az la) példában leírt módon feldolgozva 1,21 g 13|/?-metil-3-metoxi-45 -8,14-szeko-gona-l ,3 ,ö( 10) ,9(11 )-tetraén-l 4R^-ol-17-ont kapunk. A termék állandói megegyeznek az la) példában közöltekkel. 2. példa: 50 13/J-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-14R^-ol-17-on előállítása 55 a) Mycobacterium phlei (MNG 29) burgonyás ferdeagar táptalajon kinőtt 10 napos tenyészetét 5 ml 0,4%-os nátriuimklorid-oldattal szuszpendálva 3 literes Erlenmeyer-lombikban levő 1 liter táptalajra oltjuk. A táptalaj összetétele: 60 kukoricalekvár 20 g glicerin 10 g 1 literre töltve csapvízzel. A pH sterilezés előtt 65 7,0. A beoltott tenyészetet 37 C°-on 48 órán át 2
