165478. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anyagcseretermékek előállítására növényi sejtekből fermentációval

17 17. példa Differenciálatlan Catharanthus roseus szuszpenzió sejttenyészet készítése Közönséges Catharanthus roseust (Vinca rosea néven is ismert) alkalmazunk növényiszövet-te^ nyészet készítéséhez. Mintegy 10 cm magas Catharanthus roseus-magoncokat 1 cm-rel a föld felett lemetszünk, a hajtásokat 2 percig 1%-os nátrium-hipoklorit-oldatba merítve felületi sterilezést végzünk; a hajtásokat steril vízzel mossuk, majd aszeptikusán részekre vágjuk és agárral készült G táptalajt tartalmazó Petri-csészébe visszük. 25 °C-on 18 napig inkubálva hegsejtek keletkeznek, amelyeket egyenként 50 ml G táptalajt tartalmazó 250 ml-es Erlenmeyer-Joimbikba viszünk és 25 °C-on rotáló rázógépen inkubáljuk. Igen diszperz, erőteljes differenciálatlan növekedés figyelhető meg függetlenül attól, hogy a sejt melyik növényrészből, szárból, levélből származik. A differenciálatlan sejtszuszpenzió növekedését 7 naponként friss G táptalajba való átültetéssel biztosítjuk. 28. péida Differenciálódó Catharanthus roseus sejttenyészet készítése 7 napos differenciálatlan Catharanthus roseus szuszpenziótenyészethez 50 ml friss 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav-mentes G táptalajt adunk. Ezáltal az eredeti auxinhatást felére csökkentjük. A sejtszuszpenzió felét elöntjük, a másik felét 7 napig rázógépre helyezzük. Erélyes növekedés indul meg, az elegyhez újabb 50 ml auxinmentes G táptalajt adunk, ezt összekeverjük és a szuszpenzió felét eldobjuk. A most már csak negyedrésznyi 2,4-diklór-fenoxi-'eoetsavat tartalmazó elegyet újabb 7 napig rázatjuk. A hígítást további 3 alkalommal megismételjük, amikor harmincketted résznyi auxinaktivitást, azaz 0,031 mg/l 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav-konoentrációt kapunk. Ezt az anyagot további 4 napig inkubáljuk, amikor a Catharanthus roseus^sejtek differenciálódása, a gyökérkezdemények megjelenése figyelhető meg. Catharanthus roseusból nyerjük az antitumor-hatású viinblasztint és vinkrisztint. 19. példa Differenciálatlan Phytolacca americana szuszpenziós sejttenyészet készítése Phytolacca americana-magokat 3 hónapig 5 °C-on nedves tőzegmohába rétegezünk. Ezt követően a magokat 1 percig brómos vízbe merítve felületsterilezést végzünk, a hajtásokat steril vízzel mossuk, majd Petri-csészében steril szűrőpapírra helyezve csíráztatjuk. A csírázás azonnal megindul, a keletkező magoncokat gyökér-, alsószár-, szárrészekre vágjuik, ezeket a részeket 165478 18 5 ml 6 mg/l 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav-tartalmú G táptalajba visszük, amit 2,5 X 20 cm-es méretű edényben 28°C-on rázatunk (2,5 cm-es elmozdulás, 100/perc sebességgel). 14 nap elteltével 5 hegsejtek képződnek és hasadnak le, majd erélyes differenciálatlan növekedés indul meg. 20. példa 10 Phytolacca americana differenciálódása Az előző példában nyert differenciálatlan hegsejteket 0,5 mg/l 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav-tartal-13 mú G táptalajba visszük, ami a sejtek differenciálódását és szárszerű kezdemények megjelenés sét eredményezi. Az előző példában nyert differenciálatlan hegsejteket 1 mg/l 1-naftalin-eeetsav-tartalmú G 20 táptalajba víve gyors differenciálódást és gyökérkezdemény kialakulását tapasztalhatjuk. Phytolacca americana-ból nyerjük a Phytolacca alkaloidát és az alkörmös mitogen reagenst. 21. példa Differenciálatlan Ficus elastica sejtszuszpenzió készítése 30 Cserépben tenyésztett Ficus elastica harmadik ízközről származó levelét lemetsszük, 1%-os nátrium-hipoklorittal felületi sterilezést végzünk, majd ennek 5 X & cm-es részét aszeptikusán ki-35 metsszük. Ezt a részt 1 cm2

-es darabokra vágjuk és G táptalajba oltjuk. 21 napig tartó rázógépen végzett inkubálás után a differenciálatlan sejtek erőteljes növekedése észlelhető. A Ficus elastica termeli a növényi gumit. 40 22. példa Differenciálatlan Ficus carica szuszpenziós sejttenyészet készítése 45 Ficus carica fáról fiatal levelet metszünk le, felületét sterilezzük, részekre vágva G táptalajba oltjuk. 15 nap után erőteljes hegsejtnövekedés tapasztalható. Ezeket folyékony G táptalajt tar-50 talmazó rázóedénybe visszük, ahol diszperz tenyészet alakul ki. 0,5 mg/l 1-inaftalkHeoetsav-tartalmú G táptalajba való oltáskor differenciálódás és gyokérkezdemény-növekedés következik be. Ficus carica, az egyszerű füge, a tejet koa-TM" guáló ficin enzimet termeli. 23. példa 60 Camptotheca acuminata sejttenyészet készítése Camptotheca acuminata-magok felületét 10 percig 1°/Q-OS nátrium-hipoklorlttal sterilezzük, steril vízzel mossuk, és Petri-csészében nedves 65 szűrőpapíron csíráztatjuk. A keletkező magonco-