165431. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az SL 21429 jelű fiziológiailag hatásos fermentációs termék előállítására
165431 Research and Development Series 2, 26—27 (1961)] című könyvében található leírásnak. A leírásban foglaltaktól morfológiailag egyedül á termőtesteknek hangsúlyozottan zöld színében tér el, amelyet a szőrök színe okoz. Az NRRL 3877 jelű új törzs számos, a gombák szokásos tápanyagait tartalmazó táptalajon tenyészthető. Ez a törzs felhasználja a szénhet?rotróp mikroorganizmusok szokásos tápanyagait, például szőlőcukrot, szacharózt, keményítőt, tejcukrot, dextrint stb. mint szénforrást, szerves és szervetlen, nitrogéntartalmú vegyületeket, például peptont, élesztő- vagy húskivonatot, amnióniumszulfátot, ammóniumnitrátot, aminosavakat, mint nitrogénforrást, valamint a szokásos ásványi sókat és nyomelemeket. Az SL 21429 jelű új fermentációs terméket úgy állíthatjuk elő, hogy egy folyékony táptalajt beoltunk a Chaetomium globosum új törzsének spóraszuszpenziójával, és a tenyészetet 6— 12 napig, előnyösen 10 napig 12—37 °C-on, előnyösen 27 °C-on 5,7—6 pH-értéken inkubáljuk. A tenyésztést aerob körülmények között felületi tenyészettel vagy merülő tenyészettel rázás közben vagy fermentorokban levegő vagy oxigén átbocsátásával, keverés közben végezhetjük. Mihelyt maximális mennyiségű SL 21429 termék keletkezik, szűrjük, és a terméket extrakciós és/vagy adszorpciós módszerrel ismert módon kinyerjük a tenyészet szűr edékébői, illetve a micéliumból. Az SL 21429 terméket kromatografálással, kristályosítással vagy ellenáramú megosztással különíthetjük el a nyers kivonattól. Egy előnyösnek bizonyult módszer szerint a szüredéket etilénkloriddal extraháljuk, de más szerves oldószer, például benzol, kloroform, butilacetát, butanol vagy etilacetát is alkalmas. Ezután az oldószert a kivonatból például desztillációval eltávolítjuk, és a maradékot az új termék elkülönítésére adszorbenseken (agyagon, kovasavgélen, magnéziumszilikáton) kromatografálva, ellenáramú megosztással vagy kristályosítással tisztítjuk. Az SL 21429 jelű új fermentációs termék antibiotikus hatása nem jelentős. Legkisebb gátló koncentrációja például Histoplasma capsulatummal szemben 100 f-igfnü. Ellenben más értékes farmakológiai hatásai vannak, és ezért gyógyszerként használható. Az új terméknek elsősorban ödémagátló hatása értékes, amelyet állatkísérletek (patkányok bradikinin-lábödémája) bizonyítanak. Az alkalmazott adagok az alkalmazás módjától és a kezelendő beteg állapotától függenek. Kísérleti állatokon általában kielégítő eredmény érhető el napi 0,1—100 mg/kg adaggal. Ez az adag szükség esetén 2—3 részletben vagy retard alakban adható be. Az SL ,21429 jelű termék gyomorfekély keletkezését gátló hatása is jelentős és hasznos, mint azt fenilbutazon által kiváltott fekélyes patkányokon, továbbá Shay-patkányokon végzett kísérleteink eredménye igazolja. Az alkalmazott adagok a beadás módjától és a kezelendő állapottól függenek. Kísérleti állatokon kielégítő eredmény érhető el általában napi 0,1—10 mg/kg adagokkal. Ez az adag szükség esetén 2 —3 részletben adható be. Igen értékes és jelentős az SL 21429 termék 5 immunoszupresszív hatása a sejtimmunitásra. A „target-cell destruction" tesztben [Immunology 18, 501 (1970)] (a „target cells" „céltábla sejtek" atipikus vörös vértestek egy viszonylag hemogiobinmentes gyűrű által elválasztott hemoglobin-10 tartalmú citoplazmából álló perifériális gyűrűből és központi magból) az új termék gátolja a vörös vértesteknek a szenzibilizált lépsejtek okozta lízisét in vitro hozzáadás esetén. 1 mg/liter adagnál 100%-os gátlás van. 15 Nagyobb emlősállatoknál az SL 21429 jelű új termék napi adagja 10—100 mg. Orális beadásra a részadagok 4—50 mg új terméket tartalmaznak szilárd vagy folyékony hordozóanyagok mellett. 20 A találmány szerint előállított SL 21429 jelű új termék gyógyszerként magában, éspedig kristályos vagy amorf alakban vagy nyers koncentrátumban vagy megfelelő gyógyszerkészítményekben perorálisan, parenterálisan vagy ente-25 ralisán adhatjuk be. A következő példa szemlélteti a találmány szerinti eljárást anélkül, hogy azt erre korlátoznánk. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 30 Példa Fermentorban 10 liter táptalajt, amely litere n-35 ként: 40 45 0,01 g ZnCL-ot, 0,01 g MnCl2 . 4H 2 0-et, 0,005 g CuS04 . 5iH 2 0-et, «,005 g CoCl2 . 6H 2 0-et, és 50 ionmentesített vizet tartalmaz, beoltunk az NRRL 3877 jelű törzs 10 ml-nyi spóraszuszpenzió jávai, amely milliliterenként 108 spórát tartalmaz, és a beoltott táptalajt levegőztetés (1 liter levegő/perc/liter tápoldat) és keve-55 rés közben (300 fordulat/perc) 10 napig 27°-on 5,7 pH-értéken inkubáljuk. A fermentlevet szűrjük, és körülbelül 9 liter tenyészetszüredéket és körülbelül 1 kg micéliumot kapunk. A tenyészetszüredéket 3 ízben 9 liter etilénkloriddal ext-60 raháljuk. Ezután a szerves fázist 2 ízben 4—4 liter vízzel mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, és szárazra bepároljuk. Petroléterrel való zsírmentesítés után a nyers kivonatot kovasavgélen (Merck, 0:05—0,2 mm) kromatograf áljuk, az 65 SL 21429 jelű új terméket kloroform és metanol 50,0 g maltózt, 10,0 g bablisztet, 1,0 g peptont, 0,5 g élesztőkivonatot, 0,5 g KHaPCVot, 0,5 g MgSCv,. 7H2 0-et, 0,5 g Ca(N03 ) 2 -ot, 0,1 g NaCl-ot, 0,05 g FeSO/, . 7IH2 0-et,
