165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
47 165408 48 teljük; ezúttal a 82—130. frakciót és a 180—234. frakciót egyesítjük. A leírt két frakcionálási művelet során kapott és a fenti módon egyesített frakciók közül egyesítjük egymással az első hatóanyagot tartalmazó egyesített frakciókat, és az ígv kapott elegyet egy 100 ml Amberlite XAD—2 gyantát tartalmazó ágyon adszorbeáltatjuk. Az ágyat azután 100 ml vízzel mossuk, majd háromszoros térfogatú 90%-os metanollal eluáljuk. Az eluátumból a metanolt vákuumban elpárologtatjuk, és a kapott vizes koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon 810 mg 7A-(D~5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-Jaidroxi-cinna.moiloximetil)-7~metoxi-cef-3-em--4-karbonsavat kapunk. E termék biológiai hatásosságát a szokásos korongmódszerrel vizsgáljuk Proteus vulgaris mikroorganizmussal, szemben; a termék 18 mcg/ml koncentrációjú oldata 25 mm átmérőjű gátlási zónát ad. A kapott termék ibolyántúli abszorpciós színképe a következő jellemző adatokat mutatja: 0.1 n HCl-ben \iaX . 350 (F^ ^ 524); 1% 0.1 n NaOH-ban: /-ma . v . 328 (Ej ^ 564). F) 7ß-(D-5-amino~5~karboxi-valerarnido)-3--(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetü)-7--meloxi-cef-3-em-4-karbonsav Az E) alatt leírt két frakcionálási művelet során kapott egyesített frakciók közül a második hatóanyagot tartalmazó egyesített frakciókat egyesítjük egymással, és 100 ml Amberlite XAD —2 gyantát tartalmazó ágyon adszorbeáltatjuk a hatóanyagot, A gyantaágyat egyszeres térfogatú vízzel mossuk, majd 90% metanol és 10% víz elegyének háromszoros térfogatával eluáljuk az ágyat. A hatóanyagban gazdag eluátumokat egyesítjük, és a metanolt vákuumban elpárologtatjuk. A maradékként kapott vizes koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon 720 mg 7,^(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(cHmetoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)-7^metoxi-cef-3-em-4-karbonsavat (Ic) kapunk. E termék ibolyántúli abszorpciós színképe a következő jellemző adatokat mutatja: 0.1 n HCl-ben: /,„„. 287 ^^432); 1% 0,1 n NaOH-ban: /maA .. 280 (Ej ^ 432). fi. példa A 7ß-(D-5-arnino~o-karboxi-vdleramido)-3--(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetü)-7--metoxi-cef-3-em-4-karbonsav elkülönítése a 810A antibiotikum-elegyből Az 5. példa D) lépésében kapott 810A antibiotikum-elegyből, amely 7/«(D-5-amino~5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)-7-'metoxi-cef-3-em-4^karbonsavat (Ic) és 7jff-(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-hidroxi-cinnamoüoximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsavat tartalmaz, 20,0 g meny-5 nyiséget 200 ml vízben oldunk és az oldat pH-értékét 3,5-re állítjuk. Ezt az oldatot azután egy 200 ml Amberlite IRA—68 anioncserélő gyantát (kloridciklusban) tartalmazó ágyon vezetjük keresztül, majd az ágyat 300 ml vízzel 10 mossuk, azután pedig 1 liter 1 tf/tf%-os vizes hángyasavoldattal eluáljuk, ezután pedig két rész 0,95 pH-értékű híg sósavat adunk hozzá. A betáplált eredeti oldatot, az ágyról lefolyó oldatot, a mosóvizet, valamint az 1., 2. és 3. eluátu-15 mot papírelektroforézissel vizsgáljuk, 4,0 pH-értéken, 1000 V egyenárammal, egy óra hosszat. A papírt azután megszárítjuk, a sav semlegesítése céljából ammóniagőz hatásának tesszük ki, majd egy Proteus vulgaris MB—838 törzzsel be-20 oltott ágaros táptalajlemezen inkubáltatjuk. 37 °C hőmérsékleten történő 17 órai inkubálás után a betáplált eredeti oldat két gátlási zónát mutat (az anód irányában): az ágyról lefolyó folyadék, valamint a hangyasavas eluátumok csupán 25 egy komponenst mutatnak (a fenti két komponens közül azt, amelyik lassabban vándorol az elektroforézis során), míg a második sósavas eluátum ugyancsak egy komponenst mutat, de ez az eredeti oldatban jelenlevő gyorsabban ván-30 dorló komponensnek felel meg. Az említett közegékben jelenlevő összes szárazanyag-tartalmat, valamint a biológiai értékmérések adatait a következő táblázat tartalmazza: a> Eredeti oldat 20 g 200 ml 60 000 E la és Ib lefolyó oldat 45 + mosóvíz 11,15 g 500 ml 7 500 E Ib hangyasavas eluátum 4,52 g 1000 ml 20 000 E Ib 50 1. sósavas eluátum — 500 ml 1000 E — 2. sósavas eluátum 2,10 g 500 ml 10 000 E la Ezeket a frakciókat Amberlite XAD—2 gyantán történő adszorpció útján választjuk el: ily módon elkülönítjük a 7/?-(D-| 5-amino-5-karboxi-80 -valeramido)-3-(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)-7-metoxi-oef-3-em.-4-karbonsavat (Ic); ezt a terméket 50% metanol és 50% víz elegyével történő eluálás útján lényegileg tiszta állapotban kapjuk.
