165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
166408 23 24 reket, amelyek átlagos súlya 20-peritoneális úton a kórokozó mikroorganizmusok olyan mennyiségével fertőztünk, amely számitásunk szerint a letalis adagot képviselő LDso-értéknek, vagyis a fertőzött kontroUállatok 50%ának elpusztulását okozó mikroorganizmusadagnak háromszorosa és hússzorosa között volt (3—20 LDgo-adag). A fertőzéssel egyidejűleg, majd hat óra múlva ismét kezeltük a fertőzött állatokat, az antibiotikumnak az alább megadott módon történő beadása útján. Kontrollállatokat is alkalmaztunk, a kultúra vilurenciájának ellenőrzése és az antibiotikum által a fertőzetlen egerekre kifejtett toxikus hatás megállapítása céljából. A fertőzés után hét nappal a kísérleteket befejezettnek tekintettük és kiszámítottuk az antibiotikumnak azt a mennyiségét, amely elegendő lenne a fertőzött és kezelt állatok 50%ának védelmére; a számítást Knudsen és Curtis (J. Amer. Stat. Assoc. 42, 282, 1947) módszere szerint végeztük. A kapott eredményeket a következő IV. táblázatban foglaltuk össze. Ezekből az eredményekből látható, hogy az MA—2837 mikroorganizmus által termelt 810A antibiotikum széles hatásspektrumú szer, amely védelmet nyújt mind Gram-pozitív, mind Gram-negatív mikroorganizmusok általi fertőzéssel szemben. Bár a 810A antibiotikum orális úton (p.a.) történő beadás esetén is hatásos, a legjobb eredményeket szubkután (s.c.) vagy intraperitoneális (i.p.) beadás esetén érték el. Az antibiotikum-elegy a fertőzetlen egereket nem ölte meg, ha intraperitoneális úton két, egyenként 1 mg hatóanyagot tartalmazó adagot, vagy pedig szubkután vagy orális úton két, egyenként 18 mg hatóans'agot tartalmazó adagot adtunk be áz állatoknak. IV. táblázat A BIO A antibiotikum aktivitása in vivo Kísérleti mikroorganizmus Proteus vulgaris A beadás EDso-érték módja mcgX2 adag Az antibiotikumok előállítása fermentáció útján 810A antibiotikum: A 810A antibiotikumot az 5 MA—2837 Streptomyces griseus kultúrának megfelelő vizes tápközegben lefolytatott aerob fermentációja útján állítjuk elő. Vizes tápközegként oly összetételű tápközegek alkalmazhatók, amelyek általában alkalmasak más antibio-10 tikumok termelésére is. Az ilyen tápközegek a mikroorganizmusok által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást, valamint szervetlen sókat tartalmaznak. Asszimilálható szénforrásként a tápközegben 15 általában szénhidrátok, mint cukrok és hasonlók, pl. glükóz, arabinóz, maltóz, xilóz, mannit stb., keményítőfélék és lisztek, pl. zab-, rozs-, kukoricakeményítő, kukoricaliszt és hasonlók egymagukban vagy keverékekben alkalmazha-20 tók. A tápközegben hasznosításra kerülő szénhidrát pontos mennyisége függ a tápközeg egyes alkotórészeitől is, általában azonban a szénhidrát mennyisége a tápközegben kb. 1 súly% és 6 súly% között lehet. Az említett szénforrások 35 egymagukban vagy kombináltan is alkalmazhatók. Nitrogénforrásként általában bármely fehérjetartalmú anyag felhasználható. Alkalmas nitrogénforrások pl. az élesztő-hidrolizátumok, élesz-30 tő-autolizátumok, szójaliszt, kazein-hidrolizátumok, kukoricalekvár, cefresűrítmény, paradicsompép és hasonlók. Az említett nitrogénforrások — egymagukban vagy kombinációban — kb. 0,2 súly% és 6 súly% közötti mennyiségben al-35 kalmazhatók a vizes tápközegben. Az alábbiakban felsorolunk néhány jellegzetes tápközegösszetételt, amelyek jó eredménnyel alkalmazhatók a 810A antibiotikum előállítása során. Ezek az itt felsorolt tápközeg-összetételek, valamint 40 a később következő példákban leírt további tápközegek csupán szemléltetik a találmány keretében felhasználható tápközeg-összetételek igen széles körű változatosságát; a találmány azonban semmilyen szempontból nincs ezeknek 45 a konkrétan megadott tápközegeknek az alkalmazására korlátozva. Proteus mirabilis Salmonella schottmuelleri Escherichia coli Escherichi coli Klebsiella pneumoniae Salmonella gallinarum Salmonella pullorum Diplococcus pneumoniae Staphylococcus aureus Streptococcus pyogenes i.p. s.c. 33 500 50 í. tápközeg: p.c. 12100 ,,Difco" élesztőkivonat 10,0 8 i.p. 200 glükóz 10,0 g p.o. 5000 foszfát-puffer 2,0 ml i.p. 419 MgS04 . 7H 20 0,05 g s.c. 9000 55 desztillált víz 1000,0 ml i.p. 3750 ,,Difco" agar A foszfát-puffer összetétele: 25,0 g i.D. 1330 KH2 PO^ 91,0 g i.p. 2500 Na2 HP0 4 95,0 g i.p. 1670 60 desztillált víz 1000 ml i.p. 625 i.p. 258 II. tápközeg: i.p. 927 i.p. 625 65 húskivonat 3,0 g
