165192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására

165192 11 12 hőmérsékleten 5 napon át keverjük. A táptalajon annak egységnyi térfogatára vonatkoztatva, percenként fél térfogat steril levegőt buborékoltatunk keresztül. A fermentor keverőjének fordulatszáma percenként 500 (hagyományos keverők). 3. példa Az A 477 elkülönítése A 2. példában megadott fermentációs körülmények között tenyésztett, kétszer 25 liter térfogatú tenyészetet egyesítünk és pH-ját 5 n nátriumhidroxiddal 10,5-re állítjuk be. Az egész tenyészetet ezután szűrési segédanyaggal kiegészítve szűrjük, a micéliumos szűrési maradékot vízben szuszpendáljuk és egy órán át keverjük. Ezután szűrjük a szuszpenziót, a micéliumos szűrési maradékot kidobjuk. A szűrleteket egyesítjük, így 66,5 liter szűrt lét kapunk. Ennek pH-ját 3 n sósavval 8,0-ra állítjuk be, majd 12X40 mesh szemcsenagyságú aktív szénnel töltött (vízzel) oszlopon átengedjük. Az oszlopot 15 liter vízzel mossuk, az eluátumot kidobjuk. Ezután 20 liter 2,5 pH-jú vizes sósavoldattal mossuk az oszlopot, az eluátumot ismét kidobjuk. Ezt követően az aktív szenet tartalmazó kromatografáló oszlopot 3 n sósavval pH 2,0-re beállított acetonból és vízből (1:1) álló eleggyel eluáljuk. Az eluátum pH-ját 5 n nátriumhidroxid-oldattal 7,5 és 8,0 közé állítjuk be, majd 1700 ml térfogatúra töményítjük. A tömény eluátumot 7 cm átmérőjű és 60 cm magas, vízzel mosott poliamid gyantával töltött oszlopon engedtük át. [A poliamid gyanta Nylon 66-ból (polihexametildiamin-adipát), Nylon 11-ből (poliaminoundekánsav), Perlon-ból (polikaprolaktám) és acetilezett Perionból készül.] A poliamid gyantán adszorbeálódott antibiotikumot nyolc liter vízzel eluáljuk, az eluátumot több részletben szedjük. Az A 477-et tartalmazó frakciókat egyesítjük és desztillációval töményítjük. A tömény oldathoz négyszeres térfogatú metanolt, majd azonos térfogatú étert adunk, amikér az A 477 jelű antibiotikum kicsapódik. Az antibiotikumot szűréssel elkülönítjük, majd szárítjuk, amikor 1,1 g súlyú terméket kapunk. További A 477 különíthető el, ha a poliamid oszlopot metanol és víz 1:1 arányú elegyével eluáljuk. Az A 477-tartalmú frakciókat egyesítés után töményítjük. A tömény oldathoz négyszeres térfogatú metanolt adunk, majd az antibiotikumot azonos térfogatú éter adagolásával csapjuk ki az oldatból. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, amikor 3,0 g súlyú antibiotikumot kapunk. 4. példa Az A 477 jelű antibiotikum tisztítása alumíniumoxiddal. A 3. példa szerinti eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy az aktív szénből készült oszlopról eluált aktív oldat pH-ját 5 n nátriurahidroxid-oldattal 7,5 és 8,0 közé állítjuk be, majd 200 ml térfogatúra töményítjük. 5 A tömény, aktív oldat 100 ml-ét 2,7X80 cm nagyságú, savas pH-jú vízzel mosott alumíniumoxidot („high quality" minőség) tartalmazó kromatografáló oszlopra. engedjük. Az oszlopot két liter metanollal mossuk, az eluátumot kidobjuk. 10 Az A 477 jelű antibiotikumot víz és metanol 1:1 arányú elegyével eluáljuk, az aktív frakciókat egyesítjük és desztillációval eltávolítjuk az oldószert (vizet és metanolt). A száraz desztillációs maradékot 100 ml 50%-os vizes metanolban old-15 juk. Az oldatot 2 liter acetonhoz csepegtetjük, amikor az oldatból kiválik a tiszta A 477. Az elkülönített termék súlya 2,2 g. 20 5. példa Az A 477 hidrokloridjának előállítása A 4. példa szerinti eljárással előállított A 477 25 500 mg-nyi mennyiségét 20 ml 50%-os vizes metanolban oldjuk. Az oldat pH-ját 1 n HCl-oldattal 1,5-re állítjuk be. Az elegyet keverés közben 400 ml acetonhoz adjuk, amikor kiválik az oldatból az A 477; hidrokloridja. A csapadékot szű-30 réssel elkülönítjük, majd szárítjuk, amikor 420 mg A 477-HCl-at kapunk. 35 45 60 6. példa y Az A 477-pikrát előállítása 500 mg A 477 20 ml vízzel készült oldatához 20 ml telített, vizes pikrinsavoldatot adunk. Az 40 elegyet egy éjszakán át 5 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, amikor sárga színű csapadék válik ki az oldatból. A csapadékot szűréssel elkülönítve 505 mg sárga színű A 477-pikrátot kapunk. 7. példa Az A 477-hidroklorid előállítása A 477-pikrátból 50 505 mg A 477-pikrát 25 ml metanollal készült oldatához addig adunk 1 n sósavoldatot, míg annak pH-ja 1,5 nem lesz. A savas oldatot keverés közben 500 ml dietiléterhez adjuk, amikor kiválik az oldatból az A 477 hidrokloridja. A csa-55 padékot szűréssel elkülönítjük és szárítjuk, amikor 442 mg A 477-hidrokloridot kapunk. példa Az A 477 szabad bázis előállítása A 477-hidrokloridból 500 mg A 477-hidrokloridot 20 ml vízben oldunk, az oldatot 1X10 cm nagyságú, ioncserélő 65 gyantát (OH-) tartalmazó kromatografáló osz-