165141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás részecskealkotó fehérjék eltávolítására vérszérumból

16514! 3 Összekeverés után a keveréket előnyösen csökkentett, 0 és 20 C° közötti hőmérsékleten 1-20 órán át ülepedni hagyjuk. Ezután a keletkezett csapadékot például centrifugálással vagy más szokásos módon elválaszthatjuk. 5 A tiszta szérum réteget ezután elválaszthatjuk és tovább tisztíthatjuk például oly módon, hogy a szérumot 20 és 40 C° közötti hőmérsékleten keverés közben vákuum alá helyezzük, amíg a habzás megszű- , nik, és a szérum pH-ját például egy bázissal, mint a io nátriumhidroxid, káliumhidroxid, nátriumkarbonát, ammóniumhidroxid vagy trisz-(hidroximetil)-aminometán beállítjuk 6,5 és 8 közötti értékre. A szérumot esetleg még egy adszorbenssel, például kaloinnal kezelhetjük, továbbá centrifugálhatjuk, és szűrhetjük 15 a szérum további tisztítási céljából. Az e célra használható halogénezett egyenesláncú szénhidrogén oldószer kloroform, metilénklorid vagy széntetraklorid lehet. A következő példák a találmány előnyös megváló- 20 sításait szemléltetik. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 1. példa 25 Emberi szérum (fibrinogen anyagtól mentesített vérplazma) pH-ját 100 ml szérumhoz 1,2 ml 30%-os ecetsav hozzáadásával 5,2-re állítjuk be. A szérumhoz azonos térfogatú metilénkloridot adunk, és a keveréket 3 órán át 30°-on rázzuk. A keveréket néhány órán 30 át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 10 percen át 5000 g erővel centrifugáljuk, mire 3 réteg képződik: oldószer réteg, szilárd csapadékot tartalmazó réteg és szérumfolyadék réteg. A három réteget elválasztjuk, és a szérumréteget 35°-on keverés köz- 35 ben legalább 15 percre vákuum alá helyezzük, amíg a habzás megszűnik. A szérum pH-ját 5 n nátriumhidroxid hozzáadásával beállítjuk 7,2-re. Ezután a szérumot egy steril D-8 szűrőpárnán átszűrjük az egyéb szennyezések eltávolítására. 40 2. példa Emberi szérum (fibrinogen anyagtól mentesített vérplazma) pH-ját 100 ml szérumhoz 0,9 ml 30%-os 45 ecetsav hozzáadásával beállítjuk 5,5 értékre. A szérumhoz azonos térfogatú kloroformot adunk, és a keveréket 5 órán át 45°-on rázzuk. A keveréket néhány órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 10 percen át 10000 g erővel centrifugáljuk, mire 50 három réteg képződik: oldószer réteg, szilárd csapadékot tartalmazó réteg és szérumfolyadék réteg. A három réteget elválasztjuk, és a szérum réteget 35°-on keverés közben legalább 15 percre vákuum alá helyezzük, amíg a habzás megszűnik. A szérum pH-ját 5 n 55 nátriumhidroxid hozzáadásával beállítjuk 6,5-8 értékre. Ezután a szérumot egy steril D-8 szűrőpárnán átszűrjük az egyéb szennyezések eltávolítására. A kiadásért felel: a Közgazdasági 4 3. példa Emberi szérum (fibrinogen anyagtól mentesített vérplazma) pH-ját 100 ml szérumhoz 1 ml 30%-os ecetsav hozzáadásával 5,4 értékre állítjuk be. A szérumhoz 200 ml kloroformot adunk, és a keveréket 3 órán át 25° -on rázzuk. A keveréket néhány órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 10 percen át 7000 g erővel centrifugáljuk, mire három réteg képződik: oldószer réteg, szilárd csapadékot tartalmazó réteg és szérumfolyadék réteg. A három réteget elválasztjuk, és a szérumréteget 35°-on keverés közben legalább 15 percre vákuum alá helyezzük, amíg a habzás megszűnik. A szérum pH-ját 5 n nátriumhidroxid hozzáadásával beállítjuk 7,2 értékre. A szérumhoz 1 g kaolint adunk, és a keveréket mágneses keverővel 1,5 órán át keverjük. Ezután a szérumot egy steril D-8 szűrőpárnán átszűrjük az egyéb szennyezések eltávolítására. 4. példa Emberi szérum (fibrinogen anyagtól mentesített vérplazma) pH-ját 100 ml szérumhoz 1 ml 30%-os ecetsav hozzáadásával beállítjuk 5,4 értékre. A szérumot 3 órán át 35°-on rázzuk, és a kapott csapadékot eltávolítjuk. A folyadékhoz 300 ml kloroformot keverünk, és a keveréket néhány órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 10 percen át 7000 g erővel centrifugáljuk, mire három réteg képződik: oldószer réteg, szilárd csapadékot tartalmazó réteg és szérumfolyadék réteg. A három réteget elválasztjuk, és a szérumréteget 35°-on keverés közben legalább 15 percre vákuum alá helyezzük, amíg a habzás megszűnik. A pH-t 5 n nátriumhidroxid hozzáadásával 7,2-re beállítjuk. A szérumhoz 1 g kaolint adunk, és a keveréket mágneses keverővel 1,5 órán át keverjük. Ezután a szérumot egy steril D-8 szűrőpárnán átszűrjük az egyéb szennyezések eltávolítására. Az 1-4. példák bármelyike szerint kapott kezelt emberi szérum lényegében részecskeképző fehérjéktől mentes és alkalmas vércsoport és Rh-típus vizsgálatára. Azonkívül a példákban leírt műveletek nem befolyásolják a szérum antitest titerét. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a részecskealkotó fehérjék eltávolítására vérszérumból, olyképpen, hogy a vérszérumot összekeverjük vagy extraháljuk egy halogénezett egyenesláncú szénhidrogénnel, és a keletkezett fehérjeszerű csapadékot elválasztjuk a szérumtól, azzal jellemezve, hogy a vérszérum pH-ját beállítjuk 5,2-5,6, előnyösen 5,2-5,4 értékre, és az összekeverést vagy extrahálást 20 és 45 C° közötti hőmérsékleten végezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a vérszérum extrahálást 20 és 35 C° közötti hőmérsékleten, előnyösen szobahőmérsékleten végezzük. és Jogi Könyvkiadó igazgatója 75-1839 - Dabasi Nyomda, Budapest - Dabas