164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében
164903 25 26 lepároljuk, és a gyantás maradékot petroléterrel eldörzsöljUk. 79 g (91%),vékonyrétegkromatográfiásan csaknem tiszta, észternyomokat tartalmazó terméket kapunk. A termék kis mintáját etilacetátban felforraljuk. Vékonyrétegkromatográfiásan tisz- 5 ta, 168-171 C°-on olvadó terméket kapunk, foCj2 0= = -4,8° (c = 1, metanolban). Elemzés a C H N O képlet (M = 581,6) alapjan: 10 számitott %: C = 51,6, H = 6,76, N =16,86; talált %: C = 51,6, H = 6,8, N = 16,7. 15 c) H-Lys(BOC)-Arg-OH.2CH3 COOH.H 2 0 (M = 540) 75,5 g (0,13 mől) a b) bekezdésben kapott dipeptidet 800 ml 4:2:4 arányú ecetsav:viz:metanol elegyben oldunk, és palládium jelenlétében katalitikusan hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szUrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljUk és foszforpentoxid és káliumhidroxid fölött száritjuk. A termék ecetsavtartalma a száritás körülményeitől függően változik. 70 g (csaknem kvantitativ hozam) terméket kapunk. Ecetsavtartalom: számitott: (2 mólra) 22,2%, talált: 21,8%. Víztartalom: számitott: (1 mólra) 3,34%, talált: 3,7%. d) Z-Gln-Lys(BOC)-Arg-OH (M = 664) 70 g (0,13 mól) a c) bekezdésben kapott dipeptid, 600 ml DMF, 16,5 ml (0,13 mől) N-etilmorfolin és 60 g (0,15 mól) Z-Gln-ONp elegyét 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etilacetátban felforraljuk, és az oldhatatlan peptidet forrón kiszUrjük. A terméket tisztitás céljából 150 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 750 ml 1 n ammóniaoldattal elegyitjük. A tripeptid kikristályosodik. 66,5 g (82%) vékonyrétegkromatográfiásan tiszta terméket kapunk. e) Z-Pro-Pro-Gln-Lys(BOC)-Arg-OH (M = 858) 0,1 mől, a d) bekezdésben előállitott Z-tripeptidet 350 ml DMF-ban nagymennyiségű Pd/BaS04 katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. 2 óra elteltével a Z-csoport lehasitása végbemegy. Az elegyhez 62 g (0,115 mól) Z-Pro-Pro-OSu és 80 ml DMF elegyét adjuk, és 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etilacetátban felforraljuk, friss etilacetáttal eldörzsöljUk és éterrel mossuk. Hozam: 79,9 g. A peptapeptid vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján kb. 10% Glu-Lys(BOC)-Arg-OH-t tartalmaz, amely H-Gln-Lys(BOC)-Arg-OHrból képződött, és amely ebben a lépésben nem különíthető el. Ez a melléktermék azonban a következő lépésekben nem reagál, és egy későbbi reakciőfázisban könnyen eltávolítható. A Z-Pro-Pro-OSu-t a következőképpen állitjuk elő: 69,2 g (0,2 mől) Z-Pro-Pro-OH-t 500 ml CH9Cl9 -ban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 27,6 g (0,24 mől) HOSu -t adunk, 10 percig keverjük, -5 C°-ra hűtjük, és 41,2 g (0,2 mől) DCC 100 ml CH2 Cl 2 -dal készitett oldatával elegyitjük. Az elegyet 30 percig 0 C°-on, majd 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a karbamidot kiszűrjük, és a szurletet vákuumban szárazra pároljuk. A gyantás maradékot 500 ml etilacetátban oldjuk, 0 Cu -on gyorsan nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vizzel mossuk, majd nátriumszulfát fölött száritjuk. Az oldatot vákuumban szárazra pároljuk, és az oldószer nyomait finom vákuumban eltávolítjuk. 71 g (80%) terméket kapunk. f) H-Pro-Pro-Gln-Lys(BOC)-Arg-OH (M = 724) 71 g (82,6 mmól) megfelelő Z-vegyUletet 800 ml metanolban palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljUk. 58,2 g (97,5%) terméket kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján csak az e) lépésben képződött mellékterméket tartalmazza szennyezésként. g) Z-Gly-Pro-Pro-Gln-Lys(BOC)-Arg-OH (M = 916) 36,2 g (50 mmól) pentapeptid, 200 ml DMF és 34,8 g (90 mmól) Z-Gly-OTCP elegyét 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot 100 ml metanolban oldjuk, és a terméket 1 1 etilacetáttal kicsapjuk. A terméket tisztitás céljából meleg vizzel többször extraháljuk. A vizes extraktumot szűrjük, vákuumban bepároljuk, a maradékot pedig metanol-etilacetátból átcsapjuk. 37,1 g (81%) terméket kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján a Glu-Lys(BOC)-Arg-OH-on kivUl nem tartalmaz szennyezést. h) H-Gly-Pro-Pro-Gln-Lys(OOC)-Arg-OH.1.5CH COOH.H O Az f) bekezdésben kapott Z-vegyületet 300 ml 90%-os ecetsavban, palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szurletet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljUk és P2O5 és KOH fölött száritjuk. 35 g (97%) terméket kapunk. A termék ecetsavtartalma nem sztöchiometrikus, és a száritás körülményeitől függően változik. i) Z-Ala-Leu-GluíOBu^-OCHg 26,5 g (0,1 mól) Z-Leu-OH, 27 g (0,2 mól) 1-hidroxi-benztriazol és 200 ml tetrahidrofurán elegyéhez 0 C°-on 25,4 g H-GluíOBu^-OCHo.HCl-5 10 25 30 35 40 45 50 55 60 13
