164870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nukleozid- 5'-difoszfátok és észtereik előállítására
7 164870 8 c) Az a) alatti eljárást oly módon végezve, hogy citidin-5'-foszfát-morfolidát helyett 45-60 gos mennyiségben foszfát-dietilamin-származékot alkalmazunk, 60-63 g kitermelést kaptunk. 2. példa Citidin-5' -difoszfát-etanolamin-nátriumső (CDP-etanolamin-Na) 10 a) 17,5 g etanolamin-foszfátot és 18 g kalcium-kloridot (CaCl2 . 2 H 2 0) 55-60 ml desztillált vizben oldunk, az oldatot 4-5 ml tömény (34%-os) sósavval megsavanyitjuk és metanollal feltöltjük 500 ml térfogatra. Az elegyhez 25 g CMP-morfolidát 300 ml metanollal készitett oldatát adjuk. Néhány perc múlva erőteljes csapadékképződés tapasztalható. Kb. 3-4 óra múlva, enyhe keverés közben megkezdjük 300 ml izopropanol cseppenkint történő hozzáadását, és ezt 6-7 óra alatt fejezzük be. További 2 óra múlva a képződött csapadékot szűréssel elkUlönitjUk, vizben oldjuk, az oldatot semlegesítjük és egy 1 liter Dowex 1x2 anioncserélő gyantával (formiát-alakban, 50-100-as szitafinomságban) töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot vizzel mossuk, majd 0,02 mólos hangyasavoldattal eluáljuk a CDP-etanolamint. A CDP-etanolamin-tartalmu frakciókat egyesítjük és betöményitjUk, nátriumhidroxid-oldattal semlegesítjük és a terméket etanol hozzáadása utján kristályosítjuk. A kapott kristályos terméket leszivatással szűrjük, etanollal mossuk és megszárítjuk. 18,6-21,5 g terméket kapunk (a kiindulőanyagként alkalmazott CMP-morfolidátra számított elméleti hozam 65-75%-a). 3. példa Adenozin-5' -difoszfát-galaktőz-nátriumsó (ADP-galaktóz-Na) 14,5 g galaktóz-1-foszfát-kalciumsót 500 ml metanolban szuszpendálunk és annyi tömény sósavat adunk hozzá, amennyi a só oldatba viteléhez éppen szükséges (pH kb. 2,5-3). A fenti módon készitett galaktőz-1-foszfát-oldathoz 10 g adenozin-5'-foszfát-morfolidát (AMP-morfolidát) i200 ml metanollal készitett oldatát adjuk a kezdődő zavarosodásig. Ezután az említett AMP-morfolidát-oldat fennmaradt részét lassan, keverés közben szintén hozzácsepegtetjUk az elegyhez. Az AMP-morfolidát-oldat hozzáadásának befejezése után 2 órával megkezdjük 250 ml izopropanol lassú ütemben történő hozzácsepegtetését. 10 óra múlva a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük, vizben oldjuk, az oldatot semlegesítjük és egy 500 ml Dowex 1x2 anioncserélő gyantával (formiát-alakban, 50-100-as szitafinomságban) töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot azután vizzel mossuk, majd 0,7 mólos nátriumformiát-oldattal eluáljuk. Az ADP-galaktőzt tartalmazó frakciókat egyesítjük és egy aktlvszénnel töltött 2,0 literes oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot vizzel mossuk, majd izopropanol, víz és nátriumhidroxid-old at 50:50:0,5 arányú elegyével eluáljuk az ADP-galaktőzt. Az egyesitett eluátumot nátriumhidroxid-oldattal 7,2 pH-értékre állítjuk, betöményitjük és tízszeres térfogatú metanol hozzáadása után lecsapjuk az ADP-galaktóznátriumsóját. Hozam 6,5-7 g (a kiindulóanyagként alkalmazott A MP-morfolidát súlyára számitott elméleti hányad 46-50%-a). 4. példa Uridin-5' -difoszfát-glükóz-nátriumsó (UDPG-Na) 15,3 g glukőz-l-foszfát-kalciumsót (G-1-P-Ca) 500 ml metanolban szuszpendálunk és a szuszpendált sőt az éppen szükséges mennyiségű tömény sósav hozzáadása utján oldatba visszük. 10 g uridin-5'-foszfát-morfolidát (UMP-Mo) 200 ml metanollal készitett oldatát adjuk ezután a fenti módon elkészített G-1-P-Ca-oldathoz, annak kezdődő zavarosodásáig. Az UMP-Mo-oldat fennmaradt részét lassan, keverés közben szintén hozzácsepegtetjUk. A termékként képződő UDPG feldolgozása és elkülönítése a 3, példában leirt módon történik. Hozam 8-9 g (a kiindulóanyagként alkalmazott UMP-morfolidát súlyára számitott elméleti hozam 56-64%-a). 5. példa Uridin-5' -difoszfát-nátriumsó (UDPG-Na) 15,3 g glukóz-l-foszfát-kalciumsőt és 10 g uridin-5'-monofoszf át-morfolidátot 100 mi desztillált vizben oldunk és az oldat pH-értékét 2 n sósavoldattal 4,0-ra állítjuk. Az elegyhez metanolt adunk az elegy kezdődő zavarosodásáig (ehhez 200 ml metanol szükséges). A megzavarosodott oldatból néhány perc múlva erős pelyhes csapadék kiválása kezdődik meg. 4 órai reakcióidő után gyenge keverés közben 200 ml izopropanolt csepegtetünk 15 óra alatt a reakcióelegyhez. A levált csapadékot 1 órai állás után leszivatással szűrjük, majd vizben oldjuk és a terméket a 3. példában leirt módon kromatorgrafáljuk és feldolgozzuk. Hozam 9-10 g uridin-5'-difoszfát-glükóz-nátriumsó (a kiindulóanyagként alkalmazott UMP-morfolidát súlyára számitott elméletihozam62-70%-a). 5 20 25 30 35 40 45 50 55 60 b) Az a) alatt ismertetett előállítási eljárást oly módon megismételve, hogy 40 dimetilketont (acetont) alkalmaztunk 60-65%-os, dimetilformamidot alkalmazva 70-75%-os kitermelést értünk el. 4
