164499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 22 750 RP trombolitikus enzim előállítására

164499 6 Intravénásán beadott 0,5 mg/kg 22 750 RP enzim a házinyulat nagyon szignifikáns mértékben megvédte az olyan éren belüli koagulációtól, amelyet kollagénnel itatott nylonszálnak a nyakéren való átvezetésével lehet előidézni. /A 5 kísérlet a J. L. David és munkatársai által közölt [C. R. Soc. Biol. 162, 1763 (1968)] módszeren alapul/. Házinyúl esetében a fibrinolízis meggyorsulása az intravénásán beadott 0,05 mg/ /kg adagtól kezdve mutatható ki. 10 A 22 750 RP enzim toxicitását több állatfajon tanulmányoztuk, Az egerek 50%-ára a letalis adagot (DL50) intravénásán állapítottuk meg, és 5 mg/kg-nak találtuk; ez a beadás 5 napon át naponta megismételve változatlan marad. A lö házinyúlra intravénásán meghatározott DL50 1,5 mg/kg volt. A találmány szerint előállított terméknek ezek a tulajdonságai lehetővé teszik használatát az 20 embergyógyászatban az értrombózis, a tüdőembólia, továbbá a koszorúér, a végtagartériák és az agyartériák trombózisa megelőzésére és kezelésére. A 22 750 RP enzimet termelő mikroorganiz- 25 mus a Streptomyces fajhoz tartozik, és Streptomyces venetus DS 24 288 i(NRRL 3987) az elnevezése. A törzs beszerezhető az Amerikai Egyesült Államok Mezőgazdasági Minisztériumának peoriai törzsgyűjteményétől. 3

° A mikroorganizmust indiai talajmintából tenyésztettük ki. A S. venetus DS 24 288 mikroorganizmust az általánosan használt módszer szerint izoláltuk. Ez abból áll, hogy steril vízben kis talajmin- 35 tát szuszpendálunk, a szuszpenziót különféle koncentrációkra hígítjuk, és mindegyik hígításból egy keveset Petri-csészében levő agaros táptalaj felületén szélesztünk. 26 C°-on való néhány napi inkubálás alatt a mikroorganizmu- 40 sok elszaporodnak, ekkor a vizsgálat végrehajtására izolálni kívánt telepeket leemeljük, és ferde agar táptalajra oltjuk, ihogy bőségesebb tenyészetet kapjunk. A S. venetus DS 24 288 0,4—6/1—1,2 mikron 45 méretű ovális spórákat képez. Spóratartói spirális spóraképző szálakból állnak, ezek többnyire 5—8, de néha több spirálmenetűek, elég gyakran elkülönülten helyezkednek el az őket hordozó szálakon, de néhány elemből álló spóra- 50 tartó fürtök is megfigyelhetők. A spóraképződés módja alapján ez a törzs a Pridham-féle osztályozásban a Spira osztályba sorolható. A S. venetus DS 24 288 jól fejlődik. Jellemző tulajdonsága, hogy fekete melamin pigmentet 55 termel tirozin tartalmú közegen, kénhidrogént fejleszt, a nitrátokat erősen redukálja nitritekké, a keményítőt hidrolizálja, a zselatint elfolyósítja, a tejet előzetes koagulálás nélkül peptonizálja, és a cellulózt hasznosítja. Vegetatív mi- 60 céliumának színe a közegtől függően sárgától barnássárgáig vagy sötétbarnáig változik; a termelt oldható pigmentek árnyalata általában a közegtől függően többé-kevésbé sötét barnássárga, de egyes esetekben elérheti a feketés- 65 barnát is. Légrnicéliuma a spórásodás bekövetkeztekor kékre színeződik. A S. venetus DS 24 288 tenyésztési jellemzőit és biokémiai tulajdonságait a 3. táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban jól kifejlődött tenyészetek adatai szerepelnek, vagyis más megjelölés híján a 3 hétig 25 C°-on tenyésztettekéi. A tenyésztési sajátságokat ferde agar táptalajon és húslén figyeltük meg, amelyeket általában a Streptomyces törzsek morfológiai tulajdonságai megfigyelésére használunk. Az alkalmazott táptalajok egy részét S. A. Waksman: „The Actinomycetes" művében a 193—197. oldalakon közölt [Cronica Botanica Company, Waltham, Mass., USA )(1950)] receptek szerint készítettük; ezeket a W betű után a „The Actinomyoetes"ben használt számjelzéssel jelöltük. A többi táptalaj összetétele, illetve az ezekre vonatkozó hivatkozások a következők: A „Hickey_ és Tresner-féle agar", T. G. Pridham és munkatársai, Antibiotics Annual, 1956—1957, 950. oldal. B K. L. Jones, J. Bact. 57, 142 (1949). C W—23 recept, 2% agar adalékkal. D Élesztőkivonatos agar, T. G. Pridham és munkatársai, Antibiotics Annual, 1956—1957, 950 oldal. E Paradicsompép-zabliszt agar, T. G. Pridham és munkatársai, Antibiotics Annual, 1956— 1957, 950. oldal. F Melaminképző táptalaj, „The Actinomycetes", 2. kötet, 333. oldal 42. szám (S. A. Waksman, The Williams and Wükins Company, Baltimore, 1961). G W. E. Grundy és munkatársai, Antibiotics and Chem. 2, 401, 1952. H Szervetlen sós-keményítő agar, T. G. Pridham és munkatársai, Antibiotics Annual, 1956—1957, 951. oldal. I Szervetlen nitrogénforrást tartalmazó 1. számú táptalaj, 14. oldal, G. P. Gause és munkatársai „Zur Klassifizierung der Aetinomyceten", VEB Gustav Fischer Verlag, Jena, 1958. J Megfelel a W—1 receptnek, de 30 g szacharózt 15 g glukózt helyettesít. K Megfelel a W—1 receptnek, de 30 g szacharózt 15 g glicerin helyettesít. L Megfelel a W—18 receptnek, de 30 g szacharózt 15 g glukóz helyettesít. M Megfelel a W—18 receptnek, de a szacharózt a folyadékba részlegesen bemerülő kis szűrőpapírcsíkok helyettesítik. N „Manual of Methods for Pure Culture Study of Bacteria", Society of American Bacteriologists, Geneva, N. Y. II50—18. P Tiszta zselatin, a „Manual of Methods for Pure Culture Study of Bacteria" (Society of American Bacteriologists, Geneva N. Y. II50— 18) szerint előállítva. Q Kereskedelmi lefölözött tejpor, a gyár utasítása szerint tejjé visszaalakítva. R H. D. Tresner és F. Danga [Journal of Bacteriology, 76, 239—244 (1958)] által a kénhidrogénfejlődés vizsgálatára ajánlott közeg. 3