164499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 22 750 RP trombolitikus enzim előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. VII. 25. (RO—671) Franciaországi elsőbbségei: 1971. VII. 27. (71—27 449); 1972. VI. 12. (72—21 092) Közzététel napja: 1973. IX. 27. Megjelent: 1975. X. 31. 164499 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/10 Feltalálók: Belloc Andire vegyészmérnök, Vanves, (Hauts-de-Seine)„ Florent Jean mezőgazdasági mérnök, Párizs, Lunel Jean mezőgazdasági mérnök, Párizs, Mancy Denise farmakológus, Charenton, (Val-de-Marne), Verrier Jean mérnök, Boulogne-sur-Seine, (Hauts-de-Seine), Franciaország Tulajdonos: Rhone—Poulénc S. A. cég Párizs, Franciaország Eljárás a 22 750 RP trombolitikus enzim előállítására A találmány tárgya eljárás a 22 750 RP elnevezésű új enzim előállítására. Az új enzim trombolitikus hatású szerként különleges érdeklődésre tarthat számot, és jellemző rá az in vitro megállapított általános proteolitikus hatás. A 22 750 RP enzim a Streptomyces venetus DS 24 288 <NRRL 3987) elnevezésű és az alábbiakban részletesen leírt Streptomyces fajhoz tartozó mikroorganizmus törzs alkalmas közegben történő tenyésztésével állítható elő. A találmány szerint előállított 22 750 RP enzimnek a következő fizikai-kémiai tulajdonságai vannak: Vízben nagyon jól oldódik, víz és alkohol elegyében, valamint víz és aceton elegyében oldódik, közömbös sók, például nátriumklorid vagy ammóniumszulfát, valamint polietilénglikol tömény vizes oldatában nagyon rosszul oldódik, és vízmentes alkoholban, acetonban, hexánban, etilacetátban, éterben és klórozott szénhidrogénekben gyakorlatilag oldhatatlan. A 22 750- RP enzim protein, és a proteinek ismert reakcióit adja (biuret-reakció, Folinreakció, ponceauvörös, 12 BN amidfekete vagy Coomassie-kék színreakciók). A 22 750 RP enzim szenet, hidrogént, oxigént, nitrogént és ként tartalmaz. Elemi összetétele: 50,4% szén, 7,35% hidrogén, 17% nitrogén és 0,50% kén. 10 15 20 25 30 A dextrángélen vagy poliakrilamid-gélen való kromatografálás során tanúsított viselkedése szerint a 22 750 RP enzim molekulasúlya 40 000 ± 5000. A 10 g 22 750 RP enzim savas hidrolízistermékében a következő aminosavak mutathatók ki: 11,5 mmól aszparaginsav, 8,5 -mmol treonin, 7 mmól szerin, 3,5 mmól glutaminsav, 2,5 mmól prolin, 13 mmól glicin, 7 mmól alanin, 4,5 mmól valin, 1 mmól metionin, 2,5 mmól izoleucin, 4 mmól leucin, 5 mmól tirozin, 2 mmól fenilalanin, 3 mmól lizin, 2,5 mmól arginin és 2 mmól hisztidin. A 22 750 RP enzim fizikai tulajdonságai: Külső megjelenése: fehér por (liofilizálás után). Ultraibolya spektrum: ;(0,0S%-os vizes oldatban meghatározva): abszorpció 210 nm-nél: EÍ°^m = 187; abszorpciós minimum 250 nm-nél: E^m = = 4,35; . abszorpciós maximum 278 nm-nél: E* cm = == 13,55. Infravörös spektrum (sajtolt KBr-os keverékben meghatározva): A spektrum az 1. ábrán látható. Az abszcisszára egyrészt a mikronokban kifejezett hullámhosszakat (felső skála), másrészt a cm_1 -ben kifejezett hullámszámokat (alsó skála), az ordinátára az optikai sűrűséget vittük fel. 164499
