164476. lajstromszámú szabadalom • Kompozició és eszköz mikroorganizmusok szállítására, tárolására és felhasználására

7 164476 meghatározott mennyiségű mikroorganizmust vihetünk ibe egy mikrobiológiai elemzésre kerülő folsav- vagy Bj2-vitamin-mintába. A találmányt az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa: Stabilizált táptalajon, oltással Escherichia coli ATOC-^25922 előtenyészetet állítunk elő. Oltóanyagként a mikroorganizmus tápagar-ferdetenyészetét, vagy BHI-agaron képezett ferde tenyészetét használjuk fel. Valamennyi műveletet aszeptikus körülmények között végezzük. Az előtenyészet táptalajának összetétele a következő : pepton 0,5 g nátrium-alginát 0,5 g steril desztillált víz ad 100,0 ml Az előtenyészetet éjszakán át 37 C°-on inkubáljuk. Másnap reggel 10 ml előtenyészetet Vortex keverőberendezésen 2 percig alaposan keverünk, a keveréket a légbuborékok eloszlatása érdekében 3 percig állni hagyjuk, majd a fenti összetételű táptalajjal töltött kémcsövet 0,01 ml, az első előtenyészetből származó inokulummal beoltunk. A második előtenyészetet 8 órán át 37 C°-on inkuibáljuk. Hasonló módon állítjuk elő a fiarmadik előtenyészetet is, amelyet éjszakán át 37 C°-on mkubálunk. A harmadik előtenyészet felhasználásával működő tenyészetet állítunk elő úgy, hogy a harmadik előtenyészetből elkülönített 0,01 ml inokulummal 10,0 ml stabilizált táptalajt oltunk be, és a baktériumokat pontosan 8 órán át 37 C°on tenyésztjük. Ezután 0,01 ml így kapott működő tenyészetet (csíraszám: 2—3X108

) 15,0 ml szuszpenziós i(liofilizációs) közegbe helyezünk, és így híg, stabilizált baktériumszuszpenziót állítunk elő. A közeg összetétele a következő: pepton 0,5 g nátrium-alginát 0,5 g glükóz 7,5 g steril desztillált víz ad 100,0 ml 5 ml-es tartályba precíziós mikropipetta (B. Braun Unita I, Type No. 871010, Continuous Infusion Apparatus, katalógusszám: 71012) segítségével 0,02 ml híg foaktériumszuszpenziót mérünk be. A szuszpenziót fagyasztva szárítjuk, és a tartályt vákuumban lezárjuk. Ezután viszszaállítjuk a fagyasztva szárított alikvot eredeti térfogatát, a szuszpenziót agar-lemezre helyezzük, és megszámláljuk a kifejlődött baktériumtelepeket. 30 Escherichia coli-telep fejlődik ki. (Megjegyzés: a kompozícióban jelenlevő valamennyi mikroorganizmus kifejlődik és telepet képez.) A hígított baktériumszuszpenzióból további alikvotokat különítünk el, az alikvotokat megfelelő tartályokba mérjük be, majd a fent ismertetett módon fagyasztva szárítjuk. A re-5 konstruált minták agar-lemezen tartályonként 27—33 baktériumtelepet fejlesztenek. 10 15 25 30 40 45 50 55 60 2. példa: Az 1. példában leírt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy Escherichia coli ATOC-^2592,2 helyett Staphylococcus aureus-t (ATGC—25923) használunk. A reprodukálhatóság azonos az 1..példában észlelttel. 3. példa: Az 1. példában leírt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy Escherichia coli 20 ATCC—25922 helyett M. lysodeikticus-t (ATCC— 4698) használunk. Az 1. példáiban ismertetettel azonos mértékű reprodukálhatóságot észlelünk. 4. példa: Az 1. példában leírt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy 200 ml szuszpendáló (liofilizációs) közeget használunk. A minták agar-lemezen 13—16 baktériumtelepet fejlesztenek. 5—7. példa: Az 1. példában leírt eljárást ismételjük meg 35 azzal a különbséggel, hogy a táptalajban a következő szuszpendálószereket használjuk fel: Példa száma 5 6 7 8. példa: Szuszpendálószer zselatin bor j ú-mnagzatszér um kolloid szilikon Koncentráció (súlyo/o) 0,1 1,0 0,1 0,02 ml, az 1. példában ismertetett hígított baktériumszuszpenziót precíziós mikropipetta (B. Braun, Unita I. Type No. 871010, Continuous Infusion Apparatus, katalógusszám: 71012) segítségével 12 mm átmérőjű membránszűrő (B6 Schleicher és Schüll Inc. of Keene, New Hampshire) korongra helyezünk. A membrán anyaga vegyes cellulózészter, és a membrán a következő fizikai sajátságokkal rendelkezik: Átlagos pórusátmérő: 0,45 fi. Víz átáramlási sebessége: 52 ml/perc/cm2

(25 C°-on, 700 Hgmm nyomáskülönbségnél). Porozitás: 79%. Törésmutató: 1,510. Mielőtt a szuszpenzió alikvot részét felvin-65 nénk a korongra, a korong 1 mm-es perem-4