164431. lajstromszámú szabadalom • Eljárás noretiszteron származékok előállítására mikrobiológiai úton
164431 10 ban sterilezett 100—100 ml 2. példában leírt összetételű táptalajt oltunk. A beoltott lombikokat 24 C°-os termosztát-szobában rázatva inkubáljuk 2 napig, majd átoltjuk 10 l-es fermentor üvegben sterilezett 5 liter 2. példában leírt összetételű táptalajra. A tenyészetet 300/perc fordulatszámmal kevertetjük 5 l/perc levegő átáramoltatása mellett 24 C°-os vízfürdőben. Egy nap múlva 2 g 17!/?-hidroxi-17ia-etinil-ösztr-4^én-3-ont adagolunk 80 ml dimetilformamidban oldva. Két nappal később a fermentlét leszűrjük, a szűrletet 3XV4 térfogat etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített extraktumot vákuumban bepároljúk. A maradékot 1 mm vastag szilikagél rétegen 10% etilalkoholt tartalmazó kloroformmal futtatva preparatív rétegkromatográfiával tisztítjuk. Így 504 mg 6/?,10^,17,/?-trihidroxi-17|a-etinil-ösztr-4-én-3-ont kapunk; op. 201—204 C°; [a]D = — 69° (c = 1, metanol); Xnmx : 226 nxfi >(e = 13 600). Elemzési eredmény a C20H26O4 képletre (M = = 330,43) vonatkoztatva: számított: C 72,70% H 7,93%; talált: C 72,62% H 7,87°/0 . Infravörös színkép (KBr): »-OH 3100—3600 {max. 3470) cm-1, >'(=CH) 3250 cm" 1 , rC=0 1665 cm-1 (3-as keton), JIC=C 1620 cm'1 (J4-es kettős kötés). Mágneses magrezonancia spektrum: (DMSO-d6 ): (5CH3 (18-as =0,82 ppm, ő( CH) = 3,25 ppm i(17-es etinilcsoport), őCH (6-os) = 4,35 ppm, áCH (4-es, olefin) = 5,75 ppm. Molekulasúly a tömegspektrum alapján: 330. 8. példa: Cephalosporium asperum (MNG 82) 2 db egyhetes burgonyás ferdeagaron nőtt tenyészetéről 10—10 ml steril vízzel készített szuszpenzió 1—1 ml-ével 20 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100—100 ml 2. példában leírt összetételű táptalajt oltunk. A beoltott lombikokat 24 C°-os termosztát-szobában rázatva inkubáljuk 2 napig. Ezután a lombikokhoz 20— 20 mg 10^,17l/ S-dihidroxi-17 , a-etinil-ösztr-4-én-3--ont adagolunk 1—1 ml dimetilforimamidban oldva, majd az inkubálást még 2 napig folytatjuk. Ezután az egyesített fermentlevet 3XVí térfogat etilacetáttal extraháljuk, és az extraktumokat bepároljuk. A maradékot 1 mm vastagságú szilikagél rétegen 10%, etanolt tartalmazó kloroform futtatórendszert alkalmazva preparatív rétegkromatográfiával tisztítjuk. Így 10 15 35 40 45 50 55 106 mg 6( ff,10;/5 l ,17, / ö l -trihidroxi-17a-etinil-ösztr-4--én-3-ont kapunk. 9. példa: A 8. példa szerint Cephalosporium asperumból 20 db 100 ml-es térfogatú 2 napos tenyészetet készítünk. Ehhez lombikonként 20—20 mg ö/í.n/J-dihidroxi-na-etinil-ösztr^-én-S-ont adagolunk 1—1 ml dimetilformamidban oldva, majd az inkubálást még 2 napig folytatjuk. Ezután a fermentleveket a 8. példa szerint feldolgozva 82 mg 6ß, 10ß, 17(/ő-trihidroxi-17a-etinil-ösztr-4-én-3--ont kapunk. Szabadalmi igénypont: Eljárás az I általános képletű noretiszteron 20 származékok mikrobiológiai előállítására — ahol az a) eljárásváltozat esetében ab = —CH2 iCH 2 —, Rí = —OH, R 2 = H, a b) el járás változat esetében 25 ab = _CH 2 CH 2 —, RÍ = H, R 2 = —OH, a c) eljárásváltozat esetében ab = —CH2 CH 2 —, RÍ = OH, R 2 = —OH, a d) eljárásváltozat esetében ab = —CH=CH—, R! = —OH, R2 = H, — 30 amelyre jellemző, hogy aerob körülmények között a) Rhizopus arrhizus (MNG 86), vagy Sclerotinia sclerotiorum (MNG 83), vagy Curvularia lunata {MNG 80), vagy Absidia orchidis (MNG 13), vagy Cladosporium herbarum (MNG 84), vagy Mycogone rosea (MNG 85) törzsekkel a 17/?-hidr oxi-17ia-etinil-ösztr-4-én-3-ont 10^,17,5-_dihidroxi-l 7a-etinil-ösztr-4-én-3-onná alakítjuk át, vagy b) Fusarium lateritium (MNG 81) törzzsel a 17;/>-hidroxi-l 7«-etinil-ösztr-4-én-3-ont Qiß, 17^-dihidroxi-17ec-etinil-ösztr-4-én-3-onná alakítjuk át, vagy c) Cephalosporium asperum (MNG 82) törzszsel a 17/?-hidroxi-17«-etinil-ösztr-4-én-3-ont Sß,W'ß,17jö-trihidroxi-l 7«-etinil-ösztr-4-én-3-onná alakítjuk át, vagy d) Arthrobacter simplex (MNG 66) törzzsel a 10,ß, 17i/?-dihidroxi-l 7KZ-etinil-ösztr-4-én-3-ont 10//?,17i/^dihidroxi-17ia~etinil-ösztra-l,4-dién-3-onná alakítjuk át, és az átalakítási termékeket a fermentléből ismert módszerekkel elkülönítjük. rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 75.6130/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 5
