164371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein, valamint a kallikrein A és B komponenseinek tisztítására és kristályosítására

164371 11 12 ponenskeverék 0,32 millió KE egységben (7,2%). Ez együtt 83%. A kallikrein B komponenst tartalmazó oldat egy részét betöményítjük, úgy, hogy az oldat aktivitása mintegy 20 000 KE/ml, majd 45%-os telítettségig telített ammónium-szulfát-oldatot adunk hozzá. A kikristályosodás 6 nap alatt 20—25 C°-on megy végbe. 4 hét után a kristályokról az anyalúgot lecentrifugáljuk, a kristályokat 50%-ban telített ammónium-szulfátoldattal mossuk, majd 7,0 pH értékű 0,05 mólos foszfátpufferben feloldjuk. A kapott oldat fajlagos aktivitása 1650 KE/mg fehérje, termelési hányada 64%. e) Kristályos kallikrein A komponens előállítása A d) részben ismertetett módon a kallikrein A komponenst kikristályosítjuk. Mikroszkópban nézve a kallikrein A és a kallikrein B kristályai között különbség nem észlelhető. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kallikrein, valamint kromatográfiás úton a kallikrein A és B komponenseinek tisztítására és kristályosítására hasnyálmirigyből is-10 15 20 25 mert módon fémsókkal végzett kicsapás útján kapott csapadékból, azzal jellemezve, hogy a csapadékot eluáljuk, a kapott eluátumot sómentesítjük, bázikusan szubsztituált makropórusos ioncserélőn, célszerűen dietil-amino-etil-cellulózon vagy dietil-amino-etil-csoportokat tartalmazó térhálósított dextránon kromatografáljuk, savasán szubsztituált ioncserélővel, célszerűen karboxi-metil- vagy szulfo^etil-csoportokat tartalmazó térhálósított dextránnal kezeljük, majd a nagytisztaságú kallikreint a kapott oldatból kicsapószer, célszerűen ammónium-szulfát adagolása útján kikristályosítjuk, illetve adott esetben a nagytisztaságú kallikrein oldatát önmagában ismert módon makropórusos anioncserélőn, célszerűen dietil^amino^etil-oellulózon vagy dietil-amino-etil-csoportokat tartalmazó térhálósított dextránon kromatografáljuk és az így elválasztott komponenseket oldatukból kicsapószer, célszerűen ammónium-szulfát adagolása útján kikristályosítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a kallikreint, illetve a kallikrein A és B komponensét a gyógyszergyártásban használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal önmagában ismert módon gyógyászati készítményekké alakítjuk. 3 rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jos*i Könyvkiadó igaz.gatóía 75.6112/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 6