164325. lajstromszámú szabadalom • Eljárás angiotenzin I angiotenzin II-vé való átalakulását gátló peptidek előállítására

5 164325 6 például a savaddiciós sók, mint a hidrokloridok, hidrobromidok, acetátok és halogénacetátok, például trifluoracetát és diklóracetát. A találmány szerinti eljárással készült új vegyületek gátolják az angiotenzin I átalakulását 5 angíotenzin H-vé. Kb. 0,05-10 /ig/ml koncentrációban gátolják 50% angiotenzin I átalakulását, amikor az utóbbi koncentrációja 5 mmól. 0,5—5 mg/kg adagolási szinten a találmány szerint készült vegyületek hatásosan csökkentik a hiper- 10 tenziót patkánynál. Ebből a célból perotálisan vagy parenterálisan adhatók be egy fiziológiailag elfogadható hordozót tartalmazó készítmény alakjában. A találmány szerint készült vegyületek bioló- 15 giailag lebontható ultraibolya-abszorbensek, és ezért felhasználhatók barnító és nap ellen védő termékekben. Az új peptidek hagyományos módon készülnek a láncnak a csoportokból való felépítésével, ismert 20 reakciók alkalmazásával. Ezt a következő példákban fogjuk szemléltetni. Az 1—6. példák a Z-Ile-Pro-Pro lánc előállítását (lásd az 1. példa 1-12. lépéseit) és a lánc középső részének, vagyis Trp-Pro-Y-Pro-nak (lásd a 25 1. példa 16—21. lépését és a 12-16. példákat) előállítását és az előbb említett lánchoz való kapcsolását írják le. Ennek eredménye a Trp-Pro-Y-Pro-B 30 peptidlánc létrejötte - ebben a képletben B hidroxilcsoportot vagy -Z-Ile-Pro-Pro képletű csoportot jelent (Z a fenti jelentésű) és Y a fenti jelentésű —. 35 Ezeknek a közbülső peptidtermékeknek a terminális Trp-részéhez hagyományos reakciókkal (lásd az 1. példa 22-28. lépéseit) hozzákapcsoljuk az X csoportot, ha n 0-tól eltérő a képletben, és végül a piroglutaminilcsoportot. A 40 peptidkitermelés a kiindulási anyagokra vonatkoztatva 20-25%. A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárás végrehajtását annak korlátozása nélkül. Valamennyi aminosav L-konfigurációjú. Az 45 Rf

értékeket kovasavgélen, 9:1 térfogatarányú kloroform-metanol eleggyel határoztuk meg. 1. példa: 50 PiroglutamÜ-aszparaginil-triptofil-prolil-hisztidil-prolil-glutaminil-izoleucil-prolil-prolin 55 8 g, grammonként kb. 57,5 mg prolint tartalmazó butiloxikarbonil-prolil-gyantát éjjelen át diklórmetánnal keverünk. Ekkor a diklórmetánt szűréssel eltávolítjuk, és a gyantát a következő műveleteknek vetjük alá: 60 1. Négy izben diklórmetánnal, vízmentes etanollal és ecetsavval mossuk. 2. öt percig 80 ml n ecetsavas hidrogénklorid-oldattal rázzuk, majd ugyanezt a műveletet 65 megismételjük 25 percig friss n ecetsavas hidrogénkloriddal. 3. Négy izben ecetsavval, vízmentes etanollai és diklórmetánnal mossuk. 4. öt percig 28 ml 10%-os kloroformos trietüamin-oldattal rázzuk. Ezt a műveletet egyszer megismételjük. 5. Négy izben kloroformmal és diklórmetánnal mossuk. 6. 2,57 g terc-butiloxikarbonil-prolinnak 56 ml diklórmetánnal készült oldatával 20 percig rázzuk. 7. Hozzáadjuk 2,5 g diciklohexilkarbodiimidnek 4 ml diklórmetánnal készült oldatát, és a rázást 3 óra hosszat folytatjuk. 8. Megismételjük az 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 9. Hozzáadjuk 2,9 g terc-butiloxikarbonil-izoleucinnak 56 ml diklórmetánnal készült oldatát, és a szuszpenziót 20 percig rázzuk. 10. Megismételjük a 7., 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 11. Hozzáadjuk 2,2 g terc-butiloxikarbonil-glutamin-p-nitrofenilészternek 8 ml dimetilformamid és 20 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és a szuszpenziót éjjelen át rázzuk. 12. Négy izben diklórmetánnal mossuk, és hozzáadjuk 1,46 g terc-butiloxikarbonil-glutamin-p-nitrofenilészternek 8 ml dimetilformamid és 20 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, majd 5 óra hosszat rázzuk. 13. Megismételjük az 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 14. Megismételjük a 6. és 7. kapcsoló lépést. 15. Megismételjük az 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 16. Hozzáadjuk 4,6 g Na-terc-butiloxikarbonil-Nim

-dinitrofenil-hisztidinnek 45 ml diklórmetánnal készült oldatát, és 20 percig rázzuk. 17. Megismételjük a 7., 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 18. Megismételjük a 6. és 7. kapcsoló lépést. 19. Megismételjük az 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 20. Hozzáadjuk 3,67 g 5-butiloxikarbonil-triptofánnak 15 ml dimetilformamid és 41 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és 20 percig rázzuk. 21. Megismételjük a 7., 1., 2., 3., 4. és 5. lépést, de 1% merkaptoetanolt és 18% anizolt adunk minden savas mosófolyadékhoz. 22. Hozzáadjuk 3,54 g terc-butiloxikarbonil-aszparagin-p-nitrofenilészternek 15 ml dimetilformamiddal és 41 ml diklórmetánnal készült elegyét, és éjjelen át rázzuk. 23. Négy izben diklórmetánnal mossuk, hozzáadjuk 1,42 g terc-butiloxikarbonil-aszparagin-p-nitrofenilészternek 7 ml dimetilformamid és 21 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és 5 óra hosszat rázzuk. 24. Megismételjük az 1., 2., 3., 4. és 5. lépést. 25. Hozzáadjuk 1,55 g piroglutaminsavnak 15 ml dimetilformamid és 41 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és 20 percig rázzuk. 26. Megismételjük a 7. és 1. lépést, 4 izben etanollai mossuk, szűrjük, és káliumhidroxidon megszárítjuk. 27. A peptidgyantát 100 ml lml merkaptoetanolt és 22 ml anizolt tartalmazó trifluorecetsavban szuszpendáljuk. HMrogénbromidot buborékoltatunk 3