164311. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 23 671 RP és 23 672 RP antibiotikumok előállítására
164311 19 20 Ily módon Flf F 2 , F 3 , F 4 és F 5 jelű öt frakciót kapunk, és ezeket vékonyrétegkromatografálással tanulmányozzuk a fent leírt módon. Az F, frakció érdektelen, ezt kiontjuk. 5 Az F2 és F 3 frakciókat egyesítjük, és 30 C°-on, 20 torr nyomáson bepároljuk. így 8,3 g 23 671 RP antibiotikumot kapunk 1000/xg/mg titerű amorf fehéres por alakjában. 10 Az F4 és F s frakciókat egyesítjük, majd az előbbi módon bepároljuk. így 7,2 g 23 672 RP antibiotikumot kapunk 860jug/mg titerű fehéres amorf por alakjában. 6. példa Az 5. példa szerint kapott 20 g 23 671 RP antibiotikumot keverés közben feloldunk 400 ml 20 dietiléterben. A kapott oldatot redős szűrőn átszűrjük, A szüredékhez lassan, keverés közben hozzáadunk 1600 ml hexánt. A keveréket 2 óra hosszat 4 C°-pn állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűréssel elválasztjuk, mossuk, és megszárítjuk. így 25 18 g 23 671 RP antibiotikumot kapunk kritályos fehér por alakjában. 7. példa 30 A 6. példa szerint kapott 25 g kristályos 23 671 RP antibiotikumot 515 ml izopropiléterben 2 órai élénk keveréssel szuszpendálunk. A szuszpenziót zsugorított üvegszűrőn szűrjük. A 35 szűrőn maradt terméket 50 C°-on, 5 torr nyomáson 24 óra hosszat szárítjuk. így 20,2 g 23 671 RP antibiotikumot kapunk 1000/xg/mg titerű fehér kristályos por alakjában. 8. példa A 3. példában leírttal analóg módon készült 13 g nyers 23 672 RP-t feloldunk 1300 ml acetonban. 45 Az acetonos oldatot 7,1 g aktívszénnel színtelenítjük. A színtelenített acetonos oldatot 30C°-on, 20 torr nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml benzolban, és az oldatot felöntjük egy 1,5 cm átmérőjű és 55 cm magas, 500 Florisilból álló 50 oszlopra. Az oszlopot sorban a következő oldószerekkel mossuk: 2 liter benzol, 3 liter metilénklorid, 2 liter 95:5 térfogatarányú metilénklorid-etilacetát elegy, 2 liter 90:10 térfogatarányú metilénklorid-etilacetát elegy, x2 liter 80:20 térib- 55 gatarányú metilénklorid-etilacetát elegy, 5 liter 50:50 térfogatarányú metilénklorid-etilacetát elegy és 2 liter etilacetát. Ilymódon számos frakciót kapunk, és ezeket 60 vékonyrétegen kromatografáljuk a fent leírt módon. A 23 672 RP-ben dús frakciókat egyesítjük, majd 30 C°-on, 20 torr nyomáson bepároljuk, így 4 g félig tisztított 23 672 RP antibiotikumot kapunk fehéres amorf por alakjában. 65 9. példa A 8. példa szerint készült 4 g 23 672 RP antibiotikumot feloldjuk 80 ml dietiléterben. A kristályosodást kiváltjuk 120 ml hexán lassú hozzáadásával. így 2,5 g 1000jug/mg titerű fehér kristályos terméket kapunk. 10. példa A 9. példa szerint készült 8 g kristályos 23 672 RP antibiotikumot 800 ml széntetrakloridban élénk keverés közben 2 óra alatt szuszpendálunk. A kapott szuszpenziót zsugorított üvegszűrőre visszük. A szűrőn maradt kristályokat 50 ml széntetrakloriddal mossuk, majd 40 C°-on, 5 torr nyomáson 2 óra hosszat szárítjuk. A száraz terméket ismét szuszpendáljuk 150 ml széntetrakloridban, és a keveréket visszafolyatás közben 1 óra hosszat forraljuk. Az oldatot lassú keverés közben 15 óra alatt 20 C°-ra hűtjük, majd 24 óra hosszat 0 C°-on tartjuk. A képződött kristályokat szűréssel elválasztjuk, mossuk, és 15 óra hosszat 45 C°-on, 5 torr nyomáson szárítjuk. így 4,2 g 23 672 RP antibiotikumot kapunk 1000/ig/mg titerű fehér kristályos por alakjában. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás 23 671 RP és 23 672 RP antibiotikumok előállítására azzal jellemezve, hogy Streptomyces chryseus DS 12 370 (NRRL 3892) törzset a Streptomyces nembe tartozó mikroorganizmusok tenyésztésére általánosan használt, szenes nitrogénforrást tartalmazó táptalajon és körülmények között aerob módon tenyésztünk, a keletkezett fermentléből az antibiotikumok keverékét extraháljuk, azt frakcionálással szétválasztjuk, és az így kapott 23 671 RP és 23 672 RP antibiotikumokat külön-külön megtisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy oltóanyag tenyésztésére olyan sterilizált táptalajt használunk, amelynek 120 litere 600 g peptont, 600 g húskivonat-szárazanyagot, 1200 g glukózmonohidrátot, 600 g nátriumkloridot, 240 g agart és vizet tartalmaz, és termelő tenyésztésre olyan sterilizált táptalajt használunk, amelynek 400 litere 2 kg szeszmoslék-szárazanyagot, 16 kg szemesbab-őrleményt, 4 kg glicerint, 2 kg nátriumkloridot, 4 kg glukózmonohidrátot és vizet tartalmaz. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az antibiotilcumökat tartalmazó fermentlevet szűrjük, a szüredéket külön fázist alkotó szerves oldószerrel extraháljuk, az antibiotikumokat kromatografálással elválasztjuk, és külön-külön átkristályosítással tisztítjuk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a 23 67.Í RP antibiotikum előállítására azzal jellemezve, hegy a 8 pH értékűre beállított fermentlevet szűrjük, a 7 pH-ra beállított szüredéket metilénkloriddal extraháljuk, a kivonatot csökkentett nyomáson bepároljuk, a koncentrátu-10
