164156. lajstromszámú szabadalom • Eljárás YA-56 antibiotikum előállítására

19 164156 20 4. példa Az YA 56-X antibiotikum elkülönítése és tisztítása 2,4 liter keresztkötésű dextrángélt (Sephadex G—15, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég terméke) 2 liter 11 n sósavoldattal elegyítünk, és a keveréket 2 órán át forraljuk. A keveréket lehűtjük, és a dextrángélt addig mossuk, amíg a mosófolyadék pH-értéke kb. 6,2 lesz. Ekkor a dextrángélt 5 cm átmérőjű, 135 cm magas oszlopba töltjük. 1,78 g a 2. példában kapott YA 56 antibiotikumot (rézkelát, hidroklorid), 0,02 mólos vizes nátriumklorid-oldatban oldunk, és az oldatot a fenti módon készített dextrángél-oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 0,2 mólos vizes nátriumklorid-oldattal eluáljuk. 245 ml, YA 56-X antibiotikumot tartalmazó frakciót, majd 1400 ml, YA 56—Y antibiotikumot tartalmazó frakciót különítünk el. Az YA 56—X antibiotikumot tartalmazó frakciót fagyasztva szárítjuk. 1,21 g kék színű port kapunk, amely kis mennyiségű nátriumkloridot tartalmaz. A kapott port 18 ml 5:1 arányú metanol -víz elegyben oldjuk, és az oldatot, 2,4 liter alkilezett keresztkötésű dextrángélt (Sephadex LH-20, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég gyártmánya) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot metanollal eluáljuk. 190 ml kék színű, biológiai aktivitással rendelkező frakciót gyűjtünk össze, és ezt a frakciót csökkentett nyomáson 20 ml végtérfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz ötszörös térfogatú acetont adunk. A kivált kék színű port centrifugálással elkülönítjük, és a kapott anyagot (száraz súly: 237 mg) 5 ml metanolban oldjuk. A metanolos oldatot keresztkötéses dextrángéllel (Sephadex G-l 5, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég terméke) töltött oszlopon bocsátjuk át, és az oszlopot metanollal eluáljuk. A papirkromatográfiás elemzés alapján 0,30 Rf-értékkel rendelkező terméket tartalmazó frakciókat (eluálószer: 15:10:3:12 arányú n-butanol — piridin — ecetsav - víz elegy) egyesítjük, és csökkentett nyomáson betöményítjük. A koncentrátumhoz fölöslegben vett acetont kapunk. A kivált csapadékot leszűrjük és szárítjuk. 167 mg kék, porszerű YA 56—X antibiotikumot (rézkelát, hidroklorid) kapunk. 150 mg YA 56-X antibiotikumot (rézkelát, hidroklorid) 15 ml abszolút metanolban oldunk, és az oldatba szobahőmérsékleten száraz hidrogénszulfid-gázt vezetünk. A kivált barna csapadékot centrifugálással eltávolítjuk, és a halványsárga folyadékfázisból csökkentett nyomáson lepároljuk a metanolt. A maradékot vákuumban szárítjuk, majd metanolban oldjuk, és az oldatot alkilezett keresztkötésű dextrángélt (Sephadex LH—20, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég gyártmánya) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. Eluálószerként metanolt használunk. A biológiai aktivitással rendelkező frakciókat összegyűjtjük, és a kapott oldathoz fölöslegben vett acetont adunk. A kivált fehér csapadékot centrifugálással elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd szárítjuk. 97,5 mg fehér, porszerű YA 56-X antibiotikumot kapunk hidrokloridja alakjában. 5. példa Az YA 56-Y antibiotikum elkülönítése és tisztítása 10 A 4. példában kapott, YA 56-Y antibiotikumot tartalmazó, 1400 ml térfogatú frakciót fagyasztva szárítjuk. 5,5 g kék színű port kapunk, amely csekély mennyiségű nátriumkloridot tar-15 talmaz. A poralakú terméket 30 ml 5:1 arányú metanol -víz elegyben oldjuk, és az oldatot alkilezett keresztkötésű dextrángéllel (Sephadex LH-20, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég terméke) töltött, 5X135 cm méretű oszlopon 20 bocsátjuk át. Az oszlopot metanollal eluáljuk. A kapott 300 ml térfogatú, kék színű, biológiai hatással rendelkező frakciót csökkentett nyomáson 30 ml végtérfogatra bepároljuk, és a koncentrátumhoz 25 200 ml acetont adunk. A kivált porszerű, kék anyagot centrifugálással elkülönítjük. A kapott kék port (száraz súly: 400 mg) a 4. példában ismertetett módon keresztkötéses dextrángéllel (Sephadex G-l 5, a Pharmacia Fine Chemical Co. 30 cég gyártmánya) töltött oszlopon, majd alkilezett keresztkötéses dextrángéllel (Sephadex LH-20, a Pharmacia Fine Chemical Co. cég gyártmánya) töltött oszlopon kromatografáljuk. 78 mg YA 56—Y antibiotikumot kapunk rézkelátja formájá-35 D£

w-60 mg így kapott YA 56-Y antibiotikumrézkelátot 6 ml abszolút metanolban oldunk, és az oldatba szobahőmérsékleten száraz hidrogénszulfid-gázt vezetünk. A kivált barna csapadékot 40 centrifugálással eltávolítjuk. A halványsárga folyadékfázisból csökkentett nyomáson lepároljuk a metanolt, és a maradékot vákuumban szárítjuk. A száraz maradékot 2,5 ml metanolban oldjuk, és az oldathoz 20 ml acetont adunk. A kivált fehér 45 csapadékot centrifugálással elkülönítjük, acetonnal mossuk, és szárítjuk. 58 mg fehér port kapunk. A kapott fehér port 1,5 ml metanolban oldjuk, és az oldatot alkilezett keresztkötésű dextrángéllel (Sephadex LH-20, a Pharmacia Fine Chemical 50 Co. cég találmánya) töltött, 1,8X90 cm méretű oszlopon bocsátjuk át. Eluálószerként metanolt használunk. A papirkromatográfiás elemzés alapján Rf = 0,45 értéknél megjelenő anyagot (eluálószer: 15:10:3:12 arányú n-butanol - piridin —ecetsav 55 -víz elegy) tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldathoz fölöslegben vett acetont adunk. A kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük, acetonnal mossuk, és szárítjuk. 34,4 mg YA 56—Y antibiotikumot kapunk fehér por alakjában. Szabadalmi igénypont: Eljárás YA 56 antibiotikum és YA 56-X ill. 65 YA 56—Y komponensei előállítására, azzal jelle-10