164156. lajstromszámú szabadalom • Eljárás YA-56 antibiotikum előállítására
164156 10 15:10:3:12 arányú n-butanol -piridin- ecetsav -víz elegyet használunk (a futtatást fölfelé végezzük), a kromatogramon Rf = 0,30, ill. 0,45 értéknél az YA-56-X, ill. YA 56-Y komponens-, nek megfelelő két folt jelenik meg. A komponenseket bioautográfiás úton, Bacillus subtilis vizsgálati mikroorganizmus felhasználásával mutatjuk ki. Az X és Y komponensek aránya a felhasznált YA 56 atibiotikumot termelő törzstől és/vagy a fermentáció, extrakció vagy tisztítás körülményeitől függően változhat, az antibiotikum azonban 100 súlyrész X-komponensre vonatkoztatva általában 40 súlyrésznél kisebb mennyiségű Y-komponenst tartalmaz. Az YA 56 antibiotikum egyes komponenseit (azaz az X és Y komponenst) gélszűréssel (pl. keresztkötéses dextrángél szűrőanyag felhasználásával), papirkromatográfiás úton, vagy e két módszer együttes alkalmazásával különíthetjük el egymástól. Az egyik elkülönítési módszer szerint pl. a következőképpen járunk el: az YA 56 antibiotikum rézkelátját savval kimosott keresztkötéses dextrángéllel töltött oszlopon adszorbeáltatjuk, majd az oszlopot 0,2 mólos vizes nátriumklorid-oldattal eluáljuk. Az YA 56 antibiotikum rézkelátja az oszlopon két kék színű sáv formájában jelenik meg. Az oszlop eluálását a fenti koncentrációjú vizes nátriumklorid-oldattal folytatva először az YA 56-X komponenst, majd az YA 56—Y komponenst tartalmazó eluátumokat különítjük el. Az YA 56-X, ill. YA 56-Y komponenst tartalmazó eluátumokat fagyasztva szárítjuk, ekkor a megfelelő antibiotikum-komponensek rézkelátjait kapjuk por alakjában. Egy másik eljárásváltozat szerint az YA 56 antibioti-5 kum rézkelátját papirkromatográfiás elválasztásnak vetjük alá, eluálószerként 15:10:3:12 arányú n-butianol - piridin - ecetsav - víz elegyet használunk. Az YA 56—X antibiotikum rézketálja Rf = 0,3 értéknél, míg az YA 56-Y antibiotikum 10 rézketálja Rf=0,45 értéknél jelenik meg. Az antibiotikum-komponensek elkülönítése során a foltokat vízzel eluáljuk, majd az eluátumokat fagyasztva szárítjuk. Ha a kapott komponenseket keresztkötéses dextrángéllel vagy alkilezett kereszt-15 kötéses dextrángéllel töltött oszlopon ismét kromatografáljuk, az egyes komponenseket tiszta állapotban különíthetjük el. A kapott kelátokból hidrogénszulfidos kezeléssel könnyen eltávolíthatjuk a réziont. A kapott antibiotikumok fizikai-kémiai sajátságait az alábbiakban ismertetjük. 1. Megjelenés: Az YA 56, YA 56-X és YA 56-Y antibiotikumok fehér, amorf, porszerű anyagok. 2. Olvadáspont: YA 56 (hidroklorid): 182-192 C° (bomlás), YA 56-X (hidroklorid): 198-202 C° (bomlás), YA 56-Y: 188-197 C° (bomlás). 3. Elemzési adatok: Az antibiotikumok elemzési adatait a 4. táblázatban közöljük. 20 25 30 4.táblázat YA 56-X YA 56-Y YA56 hidroklorid hidroklorid Szén Hidrogén Nitrogén Kén Klór Hamutartalom 42,93 ±1,0 5,73 ± 0,5 16,14 ±0,5 4,85 ±0,5 2,75 ± 0,5 0 42,85 ±1,0 5,55 ±0,5 14,64 ±0,5 3,57 ± 0,5 nyomokban 0 44,08-45,37 6,03- 6,22 15,35-16,40 2,57- 4,44 0,51- 3,87 1,25- 2,01 4. Molekulasúly és összegképlet: Az YA 56-X és YA 56-Y antibiotikumok molekulasúlyát és összegképletét igen nehéz meghatározni, ezeket a nagy molekulasúlyú anyagokat 50 ugyanis eddig még nem sikerült tiszta kristályos termék formájában előállítani. A fent említett elemzési adatok alapján azonban feltételezhetjük, hogy az YA 56-X, ill. YA 56-Y antibiotikum molekulasúlya (1800-2200)n ül. (1500-2000) n , 55 ahol n egész számot jelent. 5. Vízben felvett ultraibolya abszorpciós spektrum: YA 56-X antibiotikum (1. ábra): Maximum 60 234,5 és 295 mju-nál (E kf, =155,9, ül. 36,9). YA 56-Y antibiotikum (2. ábra): Maximum 240-241 mu-nál (Ei?m , = 117,5, ül. 36,4). YA 56 antibiotikum: maximum 235—236 és 295 mu-nál (El fm =116-170, ül. 27-37). 65 6. Folyékony paraffinban felvett infravörös abszorpciós spektrum: YA 56-X antibiotikum (3. ábra): 3300, 1700 (váll), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030, 995 cm-1 . YA 56-Y antibiotikum (4. ábra): 3230, 1690 (váü), 1640, 1545, 1410, 1155, 1110, 1065, 1025, 1000 cm"1 . YA 56 antibiotikum: 3230, 1700 (váll), 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030, 995 cm" 1. 7. Oldhatóság: Az YA 56, YA 56-X, ül. YA 56-Y antibiotikumok vízben igen jól oldódnak, metanolban oldódnak, etanolban rosszul oldódnak, egyéb szerves oldószerekben oldhatatlanok. 8. Színreakciók: A vizsgálatok eredményeit az 5. táblázatban ismertetjük. 5
