164131. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sertések trichinella fertőzöttségének megállapítására

164131 1. példa Az izommintát a trichinella-vizsgálatnál szokásos helyről, a rekeszoszlopból, közvetlenül az inasrészbe való átmenet közeléből több helyről nyesegetjük le, görbe olló segítségével, úgy, hogy sertésenként legalább 0,5 g legyen. 40 sertés vizsgálata esetén 20—25 g izornminta képez egy vizsgált egységet. A mintákat 100 ml 40-53 C° kezdőhőmérsékletű csapvízzel és lg papainriál (1:350 aktivitás) a keverő, például turmix készülék hengerébe töltjük és azt 10 000 fordulat/perc fordulatszám mellett 20-30 másodpercig homogenizáljuk. Ezt követően a folyadék szintjét 40-53 C° kezdőhőmérsékletű csapvízzel 700 ml-re feltöltjük és 1,5 ml koncentrált sósav hozzáadása útján a gépet 6000 fordulat/perc fordulatszám mellett 3-4 percig tovább járatjuk. Ezután az előhomogenizált anyaghoz 1,5 g pepszint adunk és a keverést további 1-2 percen át ugyanazon fordulatszám mellett folytatjuk. A lebontás befejeződése után a kissé felhabosodott oldatot ülepítőtölcsérbe, vagy választótölcsérbe töltjük. A keverőgép hengerét 2-300 ml hideg csapvízzel kiöblítjük és ezt is a tölcsérbe töltjük. i Az oldatot 15 percig ülepítjük, majd a tölcsér alján lévő csap megnyitásával 5—10 ml üledéket engedünk a vizsgáló edénybe. A lebocsátott folyadékhoz 1 ml Schiff-féle reagenst adunk, melyet a vizsgálóedény körbe mozgatásával az oldattal alaposan elkeverünk. A színezett oldatot sztreomikroszkóp segítségével 10 vagy 20-szoros nagyítással vizsgáljuk. A Schiff-féle reagenst úgy készítjük, hogy 2 g Fuchsin bázist 200 ml desztillált vízzel felforralunk, 50C°-ra lehűtjük, majd szűrjük. 20 ml 1 n HCl-t, és 1 g analitikai tisztaságú NaHS03-t adunk hozzá. Fertőzött minta esetén a trichinellák a csésze aljára (vizsgálóedény aljára) leülepszenek, ahol élő, mozgó állapotban, vagy összecsavarodve találhatók, ill. a pirosra fertőzött tokon belül fehéren maradva ismerhetők fel. 2. példa 50 sertésből származó 25 g fentiek szerint vett izommintát 1-1,5 g papainnal, 1,5-2,5 g pepszinnel, 700 ml 40-50 C° kezdőhőmérsékletű vízzel és 1,5-3 ml koncentrált sósavval 3000 fordulat/perc fordulatszám mellett keverőgépben megfelelő oldódásig keverünk. A továbbiakban a kapott oldatból a meghatározást az 1. példa szerint végezzük. Összes beadagolt trichinella: 15 perc ülepítés után vett mintában volt: 30 perc ülepítés után vett mintában volt: 60 perc ülepítés után vett mintában volt: összesen: 6 Ennél az egyfázisú oldási műveletnél a vizsgálat gyorsítása érdekében az izomminták papainnal és pepszinnel összekeverhetők, kevés vízzel hígíthatok és keverővel szétzúzhatok, ez azonban nem 5 feltétlenül szükséges. A fehérje lebontásának ideje a keverőgép minőségétől illetve az alkalmazott hús- vízvegyszer arányától függ. Jóminőségű, éles keverő-10 lapáttal rendelkező, 6000-10 000 fordulat/perc fordulatszámú géppel 2,5-3,5 perc elegendő az oldáshoz, ha a hús mennyisége a víz 4-5%-át nem haladja meg. Ha a keverőgép fordulatszáma kisebb, például 28000 fordulat/perc de a lapátok megfele-15 lőek, az oldás 3,5 perc alatt történik meg, ilyenkor azonban a hús arányát a vízhez képest csökkenteni kell, ellenkező esetben ugyanis ez az időtartam 6-10 percig elhúzódhat. 20 A vegyszerek mennyiségének növelése elősegíti ugyan a lebontást, de törekedni kell kisebb mennyiség alkalmazására, részben gazdasági szempontból, részben pedig, mert kerülni kell az oldat töménységének felesleges növelését, mert a 25 paraziták leülepedése töményebb közegben lassabban történik meg. A találmány szerinti eljárásra a következő kontroll vizsgálatot végeztük: 30 Több tételmintát vizsgálat alá vetettünk, egy-egy tételben a beadagolt izomtrichinella szám 3 és 120 között volt. Az izomtrichinellák fertőzött egér, patkány és róka harántcsíkolt izmaiból származtak, melyek nagyobb részben konzerválás nélkül 35 hűtőben álltak 1-2 évig. A kontroll vizsgálat lebonyolítása: fertőzött izomból apró mintácskát nyestünk le és azt kompresszorra téve a hagyományos vizsgálati 40 módszer szerint trichinoszkópon vizsgáltuk meg és a benne lévő parazitákat megszámoltuk. Ezt a vizsgálati anyagot, mely erősebb fertőzés esetén 1 cg-ot sem tett ki, a kompresszorról levéve beletettük friss, fertőzéstől mentes 10—30 g apróra 45 vágott sertésizom mennyiségbe. Az emésztést a megszokott módon végezzük: 700-800 ml 45-50 C° hőmérsékletű víz, 1 g papain, 2 ml koncentrált sósav, 1,5 g pepszin. Keverés előbb 30 másodpercig 10000/perc fordulaton, majd 50 r 6000/perc sebességgel 2-8 percig. A trichinellák leülepedése a következően történt általában: először az élő, tokban lévők süllyedtek le, utána az elhalt tokos és szabadon lévő élők, 55 végül az elhalt szabadon lévők. Az öreg, hosszú ideig hűtött fertőzött húsokban a trichinellák elhaltak s azok az ülepítési idő alatt (15'-60') csak részben süllyedtek el a tölcsér aljára. 3352 1553 46,33% 112 33,59% 312 9,31% 2991 89,23%