164059. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás L-piroglutamil-L-hisztidil-L-prolin-amid előállítására
7 164059 8 c) Z-His-Pro-NH-Mbh [(II) képletű termék] 13,6 g (45 mmol) Z-His-NHNH2 110 ml 1 n sósavban készített oldatát -5 C°-ra hűtjük, 75 ml etilacetátöt adunk hozzá és 3,15 g nátriumnitrit kevés vízben készült oldatát csepegtetjük bele. 5 perc múlva annyi 0 C°-ra lehűtött telített nátriumkarbonát-oldatot adunk a elegyhez, hogy az elegy kémhatása lúgos legyen. Előzetesen lehűtött rázótölcsérben az etilacetátos fázist elkülönítjük és a vizes fázist ismételten hideg etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített etilacetátos fázisokat -5 C°-on nátriumszulfáton megszárítjuk és 0 C°-on 6,8 g (20 mmól) H-Pro-NH-Mbh-val elegyítjük. Az elegyet éjszakán át jégszekrényben állni hagyjuk, a terméket másnap petroléterrel kicsapjuk. Az oldószerelegyet a kenőcsös formában kiváló anyagról dekantálással eltávolítjuk, majd az amorf terméket éterrel eldörzsöljük. Az anyagot tisztítás céljából kb. 40 g bázisos alumíniumoxidon (Woelm-gyártmány, I. aktivitási fokozat) kromatografáljuk. Eluálószerként tetrahidrofuránt alkalmazunk. Hozam: 10,5 g (86%). [ajjj0 = —31,6° (c= 1, dimetilacetamidban). Elemzés a C34 H3 7 N 5 0 6 -H 2 0 (M: 629, 7) képlet alapján: számított: C% 64,88: H% 6,25: N% 11,12: talált: C% 65,0 : H% 6,3 : N% 11,2 . d) Z-Gln(Mbh)-His-Pro-NH-Mbh [(IV) általános képletű vegyület, R,, R2 = Mbh, Ac = Z = benziloxi-karbonil-csoport] Előállítás az a) eljárásváltozat szerint. a) 6,30 g (10 mmól) Z-His-Pro-NH-Mbh-H2 0 [(II) általános képlet szerinti termék] 100 ml metanolban készített oldatához kevés Pd(OH)2 /BaS0 4 katalizátort adunk, majd az elegyen hidrogéngázt vezetünk keresztül. A gázbevezetés közben az elegy pH-ját autotitrátor segítségével, 1 n metanolos sósavoldattal 4,5 értéken tartjuk. A hidrogénezés befejeztéig az elegy 12,7 ml 1 n metanolos sósavoldatot fogyaszt. A katalizátort leszívatással eltávolítjuk, a szűrletet bepároljuk. A párlási maradékot 20 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz 1,63 ml N-etilmorfolint, (1,27 mmól), 2,7 g (20 mmól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 5,05 g (10 mmól) Z-Gln-(Mbh)-OH-t <(I) általános képletű "vegyület R = Mbh] adunk. Az elegyet lehűtjük 0 C°-ra. 2,1 g diciklohexil-karbodiimid 5 ml dimetilformamidban készült oldatát adjuk hozzá, 1 órán keresztül 0 C°-on, 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, a kivált csapadékot leszívatjuk, a szűrletet bepároljuk. A párlási maradékot etilacetát és 2 n nátriumkarbonát oldat elegyével extraháljuk, az etilacetátos fázist megszárítjuk és vízzel mossuk, bepároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsöljük és leszívatjuk. Hozam: 8,25 g (87%). A terméket tisztítás céljából kb. 25 g bázisos alumíniumoxidon kromatografáljuk. (Woelm-gyártmány, I. aktivitásfokozat). Eluálószerként tetrahidrofuránt alkalmazunk. Hozam: 6,35 g (67%). 5 [a]o 0 = -21,4° (c = 1, dimetilacetamidban). Elemzés a C53 H S7 N 7 OioH 2 0 (M: 970,1) képlet alapján: számított: C% 65,60: H% 6,13: 10 N% 10,12: talált: C% 66,1 : H% 6,3 : N% 10,0 . Előállítás a b) eljárásváltozat szerint. 15 ß) 3,4 g (10 mmól) H-Pro-NH-Mbh és 2,7 g (20 mmól) 1-hidroxi-benzotriazol 40 ml dimetilformamidban készített oldatához hozzáadunk 6,45 g (10 mmól) Z-Gln(Mbh)-His-OH-t [(III) általános képletű termék], továbbá 0 C°-on 2,2 g 20 diciklohexil-karbodiimid dimetilformamidban készült hideg oldatát. Az elegyet 1 órán keresztül 0 C°-on keverjük, eközben az elegyben finom kocsonyás csapadék képződik. Az elegyhez kb. 20 ml dimetilformamidot adva a csapadék 1 órán 25 belül feloldódik. Az oldhatatlan részt elkülönítjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot etilacetáttal elegyítjük, az etilacetátos oldatot 2 n nátriumkarbonát-oldattal kétszer, telített nátriumklorid-oldattal egyszer kirázzuk, 30 nátriumszulfáton megszárítjuk, végül bepároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsöljük. Ilyen módon 9 g amorf terméket kapunk, (94,5%). Az anyagot tisztítás céljából bázikus alumíniumoxidon kromatografáljuk. (Woelm-gyártmány, I. aktivitási foko-35 zat.) Eluálószerként te+rahidrofuránt alkalmazunk. Hozam: 7,4 g (78%). [a]|)0 = -22,0° (c = 1, dimetilacetamidban). 40 e ) L-Piroglutamil-L-hisztidil-L-prolin-amid 2,04 g (2,1 mmól) Z-Gln(Mbh)-His-Pro-NHMbh-t és 1 ml anizolt 10 ml trifluorecetsavban 1,5-2 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt 45 forralunk. Ezután az elegyet bepároljuk, a párlási maradékot éterrel eldörzsöljük és leszívatjuk. A némileg higroszkópos anyagot vízben oldjuk, kevés aktívszénnel derítjük, az oldatot anioncserélő-oszlopon (pl. Serdolit-blau oszlopon) folyatjuk keresztül 50 és liofilizáljuk. Hozam: 638 mg (88%) amorf anyag. [a]^° = -58,5° (c='l, vízben). Elemzés a C16 H 22 N 6 0 4 -H 2 0 (M: 380,4) képlet 55 alapján: számított: C% 50,5: H% 6,35: N% 22,1: talált: C% 50,5: H% 6,0 : 60 N% 21,8. 3. példa: L-Piroglutamil-L-hisztidil-prolin-amid 65 előállítása Z-Gln-His-Pro-NH-Mbh-ból 4
