163894. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzim-polimer komplex mosószeradalékok előállítására

9 163894 10 4. példa: A G-942 polimer oldat mennyiségének hatását csapadékképzési kísérletekkel tanulmányoztuk kb. 70 000 DE/ml-es Bacillus subtilis proteázoldatot használva. A csapadékokat a fentebb leírt módon mostuk és szárítottuk. Meghatároztuk a száraz csapadékok polimer tartalmát. Az eredményeket a következő táblázatban közöljük. Táblázat Száraz készít-Adag, G-942 Csapadék, meny G-942 po-8/tf% % limer tartalma % 0,25 31 0,5 63 1 80 2 85 4 89 8 89 16 77 A táblázatból kitűnik, hogy a kicsapódási arány optimális 4 és 8% közötti G-942 oldat adagolása esetén. 5. példa: Alcalase maleinsav-sztirol komplexe Alcalase (egy Bacillus subtilis által termelt enzim védett neve) oldatához hozzáadunk 5% 1:5 arányban hígított G-942 oldatot. Az oldatot 4n ecetsavval beállítjuk 4,2 pH-ra. A csapadékot szűréssel elválasztjuk, acetonnal mossuk, és megszárítjuk. A száraz termék aktivitása 2 420 000DE/g. Hozam 92%. 6. példa: Egy proteáz maleinsav-sztirol kopolimer komplexe Bacillus alkalophilusnak 800 ml 28 000 De/ml tartalmú fermentlé-szűredékéhez hozzáadunk 16 ml 1:5 hígításu G-942 polimer oldatot. Az oldatot 4n ecetsavval beállítjuk 4,2 pH-ra. A képződött csapadékot kicentrifugáljuk, metilalkohol és aceton 1:1 arányú elegyével mossuk, és megszárítjuk. A proteolitikus aktivitása 10 900 000 DE/g. Hozam 86%. 7. példa: Amiláz maleinsav-sztirol kopolimer komplexe Bacillus subtilis által termelt 200 ml amiláz-oldathoz hozzáadunk 20 ml 1:5 hígításu G-942 oldatot. Az oldatot n sósavval beállítjuk 4,0 pH-ra. A képződött csapadékot kicentrifugáljuk, és kevés vízben szuszpendáljuk. A szuszpenziót n nátriumhidroxid-oldattal beállítjuk 7pH-ra, és hozzáadunk 5 3 térfogat acetont. Szűrés, acetonnal való mosás és szárítás után a termék aktivitása 81%-a a kezdeti amiláz aktivitásnak. 10 8. példa: Egy lipáz maleinsav-sztirol kopolimer komplexe 15 600 mg lipáz-készítményt (Lipase-My, előállítja Meito Sangyo Co., Ltd., Nagoya, Japán, Candida cylindracaea fermentlevéből) tartalmazó 20 ml 4,5 pH-jú oldathoz hozzáadunk 2 ml 1:5 hígításu G-942 oldatot. Az oldatot n sósavval beállítjuk 20 3,5 pH-ra. A csapadékot centrifugálással elválasztjuk, acetonnal mossuk, és megszárítjuk. Hozam 263 mg termék. Aktivitása 90%-a az eredeti lipáz aktivitásnak. 9. példa: Egy laktáz maleinsav-sztirol kopolimer komplexe 30 1% élesztőből készült laktáz-készítményt és 0,5% zselatint tartalmazó 40 ml oldathoz hozzáadunk 4,4 ml 1:5 hígításu G—942 oldatot. Az oldatot beállítjuk 4,0 pH-ra. A képződő csapadék a 35 kiindulási oldat laktáz aktivitásának 61%-át tartalmazza. Ugyanígy, de G-942 nélkül végrehajtott vakpróba során megsavanyításra szintén csapadék válik ki. Ez a csapadék azonban az eredeti laktáz aktivitásnak kevesebb, mint 1%-át tartalmazza. 10. példa: Egy alkoholdehidrogenáz maleinsav-sztirol 45 kopolimer komplexe Alkoholdehidrogenáz szűredéket készítünk autolizált sütőélesztőből. 120 ml 7 pH-jú szűredékhez hozzáadunk 4% 1:5 hígításu G-942 oldatot. Az 50 oldatot 4n ecetsavval beállítjuk 4,5pH-ra. A csapadékot centrifugálással elválasztjuk, acetonnal mossuk, és megszárítjuk. Az így kapott 3,3 g száraz termék az élesztőszűredék aktivitásának 55%-át tartalmazza. 11. példa: Meghatároztuk két proteolitikus enzimkészít-60 meny toxikus hatását. Az egyik enzimminta hagyományos módon készült szerves oldószerrel való lecsapással. Ezt a mintát összehasonlítottuk az 1. példa szerint készült enzim-polimer komplexszel. A mintákat nátriumszulfáttal beállítottuk kb. 65 300 000 DE/g proteolitikus aktivitásra, feloldottuk 5