163708. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében
163708 7 c) H-Leu-OBu'.HCl 112 g Z-Leu-OBut-t metanolban, Pd katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A hidrogénezés alatt az elegy pH-ját automata titrálóberendezésbó'l adagolt metanolos sósav-oldattal 4,5 értéken tartjuk. A reakció lezajlása után a katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük. 61,9 g 171 C°-on olvadó, kevés leucint tartalmazó terméket kapunk. Semleges Al20 3 -on, metanolban végrehajtott kromatografálás után 56,8 g 172—173 C°-on olvadó, egységes terméket kapunk. 3. példa Cys(Trt)-Ser-Leu-OH előállítása a) H-Ser-Leu-OBuKHCl 39,4 g Z-Ser-Leu-OBu'-t Pd katalizátor jelenlétében, metanolban hidrogénezünk. A reakció alatt az elegy pH-ját automata titrálóberendezésből adagolt 1 n metanolos sósav-oldattal 4,5 értéken tartjuk. A reakció lezajlása után a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 30 g (100%) 196 C°-on olvadó terméket kapunk. A termék metanol-éteres átkristályosítás után 205 C°-on olvad. [oc]$?= -35,3° (c=2, metanolban). Elemzés C13 H 27 C1N 2 0 4 képlet alapján (M = =310,8): számított: C=50,21%, H=8,76% N=9,02%, talált: C=50,0 %, H=9,0 %, N=9,l %. b) Boc-Cys(Trt)-Ser-Leu-OBif 4,7 g (10 mmól) Boc-Cys(Trt)-OH 30 ml absz. tetrahidrofuránnal készített oldatához 0 C°-on 1,65 g (10 mmól) HOOBT-t, 3,1 g (10 mmól) H-Ser-Leu-OBuMiCl-ot, 1,3 ml N-etilmorfolint, és végül keverés közben 2,2 g DCC kevés tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahó'mérsékleten keverjük, és ezután a 2a) példában leírt módon feldolgozzuk. Az olajos maradékot bázikus Al2 0 3 -on (Woelm, I. aktivitási fok), tetrahidrofuránban kromatografáljuk. 6,6 g (91,8%) amorf, habos, vékonyrétegkromatográfiásan egységes terméket kapunk. Tapasztalati képlete: C40H 63 N 3 O 7 S (M=719,95). c) Cys(Trt)-Ser-Leu-OH 54,6 g Boc-Cys(Trt)-Ser-Leu-OBu'-t szobahőmérsékleten vízmentes trifluorecetsavban oldunk. Az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 25 C°-os fürdőhőmérsékleten vákuumban bepároljuk. A maradékhoz étert adunk, és ismét bepároljuk. Ezt a műveletet háromszor megismételjük, majd a maradékot finom vákuumban szárítjuk. A maradékot éterben oldjuk, és az oldatot telített nátriumacetát-oldattal összerázzuk. A kivált csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A kapott amorf port tetrahidrofuránban oldjuk, az oldhatatlan anyagot kiszűrjük, majd a pepiidet petroléterrel kicsapjuk az oldatból. 36,6 g (82,6%) amorf, 8 ninhidrin-pozitív szennyezést tartalmazó terméket kapunk, [<x[f,2 = +9,95° (c=2, jégecetben). Elemzés C31 H 37 N 3 0 5 S.H 2 0 képlet alapjánt (M = 5 =581,7): számított: C=64,00%, H=6,76%, N=7,23%, S=5,51%, talált: C=63,9 %, H=6,8 %, N=7,6 %, S = 5,5 %. 4. példa H-Gly-Val-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH előállítása a) Boc-Gly-Val-OH 15 8,75 g (50 mmól) Boc-Gly, 8,25 g (50 mmól) HOOBT és 8,5 g (50 mmól) H-Val-OMe.HCl 150 ml tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához 0 C°-on, keverés közben 6,5 ml (50 mmól) N-etilmorfolint, majd 11 g DCC kevés tetrahidrofuránnal 20 készített oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A maradékot a 2a) pédában leírt módon dolgozzuk fel. 10,6 g olajos Boc-Gly-Val-OMe-t kapunk. A ter-25 méket etilacetátos oldatban bázikus Al2 0 3 -on (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk. 8,7 g olajos terméket kapunk. 8,7 g fenti módon kapott Boc-Gly-Val-OMe-t 32 ml dioxánban oldunk, a dioxános oldathoz 4 ml 30 vizet adunk, majd 1—2 óra alatt 30,2 ml 1 n nátriumhidroxid-oldattal elegyítjük. 2 óra elteltével az elegyet 2 n citromsav-oldattal semlegesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 0 C°-on etilacetát és 2 n citromsav-oldat között megosztjuk. 35 Az etilacetátos oldatot 2 n citromsav-oldattal, majd vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. 7,85 g terméket kapunk. Etilacetát-petroléteres átkristályosítás után 6,5 g terméket kapunk, op.: 98—101 C°, [OC]D = +4,33° (c=2, metanolban). 40 Elemzés C12 H 22 N 2 O s képlet alapján (M=274,3): számított: C=52,52%, H=8,08%, N=10,22%, talált: C = 52,8 %, H = 8,l %, N=10,l %. 45 b) Boc-Gly-Val-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH 3,14 g (11 mmól) Boc-Gly-Val-OH és 1,82 g (11 mmól) HOOBT 45 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához 0 C°-on 2,27 g (11 mmól) DCC-et4 adunk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szoba-50 hőmérsékleten keverjük, 5,8 g (10 mmól) Cys(Trt)-SerrLeu.H2 0-t adunk hozzá, és ismét 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A csapadékot kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük. Amorf terméket kapunk, amelyet tet-55 rahidrofurán-petroléteres átcsapással tisztítunk. 7, g (93%) terméket kapunk, [a]f>2 = -11,55° (c=2, dimetilforrnamidban). A termék vékonyrétegkromatográfiásan egységes. 60 Elemzés C 43 H 57 N 5 0 9 S.H 2 0 képlet alapján (M = = 838,0): számított: C=61,63%, H=7,10%, N=8,36%, S=3,83%, talált: 65 C=61,5 %, H=7,l %, N=8,3 %, S=4,0 %. 4
