163669. lajstromszámú szabadalom • Reagens glükoz meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS A bejelentés napja: 1971. VIII. 27. B0^1316 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1970. VIII. 28. (P 20.42 828.8) Közzététel napja: 1973. III. 28. Megjelent: 1975. V. 31. 163669 Nemzetközi osztályozás: G 01 n 31/14 'eltalálok: )r. GRUBER Wolfgang vegyész, Garatshausen, ír. Prof. BERGMEYER Hans Ulrich vegyész, Tutzing, r. WERNÉR Wolfgang vegyész, Mannheim-Vogelstang, ERNT Erich gyógyszerész, München, JAWEHN Karlfried vegyésztechnikus, Tutzing, íémet Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Reagens glükóz meghatározására l A találmány tárgya reagens glükóz enzimatikus leghatározására glükóz-oxidáz és peroxidáz enzitek alkalmazásával. A glükóz-oxidázzal történő' glükóz-meghatároísnál a glükóz+02 + H 2 0 — glükonsav+H2 0 2 :akcióegyenlet szerint keletkezett hidrogénperoxid eroxidáz jelenlétben egy kromogént, pl. o-dianiziint oxidál, színváltozás kíséretében. Az oxidált romogén mérési eredménye szolgál a reakcióban ;szt vevő glükóz mértékéül. Általános törekvés a tesztreagenseknél, hogy íok az összes szükséges vegyszert előre összekevert lapotban tartalmazzák, egyrészt azért, hogy az üynevezett rutinvizsgálatok lefolytatásánál a muniráfordítást lehetőleg csökkentsék, másrészt, hogy több komponens összekeveréséből adódó hibáit kiküszöböljék. Ezeket a reagenskeverékeket a ännyebb szállíthatóság, tárolás, valamint fokozott rtósság érdekében szilárd halmazállapotban hozik forgalomba, mely szilárd keverékeknek a felisználáskor vízben könnyen kell oldódniok és vi!s oldat alakjában lehetőleg hosszú ideig stabilakik kell maradniok, hogy ne kelljen állandóan új datokat készíteni. A glükóz meghatározására szolgáló glükóz-oxiíz-(GOD)/peroxidáz(POD)-rendszerrel működő, Idig ismert reagenskeverékek azonban nem felelik meg ezeknek a követelményeknek. Különösen : tűnt ki, hogy enzimekkel általában jól összelyeztethető konzerválószerrel, így aziddal nem 10 15 20 25 30 lehet stabilizálni, mivel az oldatban a POD-aktivitás gyorsan csökken. Ezért az aziddal való stabilizálás lehetőségéről le kellett mondani, aminek viszont az volt a következménye, hogy a reagenskeverékek vízben való oldás után csak rövid ideig voltak használhatók. Azt találtuk, hogy ez a hátrány kiküszöbölhető, ha a reagens stabilizátorként az azidot 2,2'-azino-di-(3-etilbenztiazolin-szulfonsav-6)-ta! együtt tartalmazza. A glükóz meghatározására szolgáló, glükóz-oxidázt, peroxidázt, kromogént és puffert tartalmazó, találmányunk szerinti reagenst azid- és 2,2'-azino-di-(3-etilbenztiazolin-szulfonsav 6)-, (ABTS)-tartalom jellemzi. A DAS 1 648 840 számú német közzétételi leírás már ismerteti a GOD/POD-rendszer szerinti glükóz meghatározásnál az ABTS-nek, mint kromogénnek alkalmazását. Azonban ennek aziddal kombináltan való felhasználása új és nem volt előrelátható, hogy az azid és az ABTS kombinációja stabilizáló hatással lesz a reagensre, mivel ezt a hatást a két anyag külön-külön nem mutatja. A találmány szerinti reagensben az ABTS egyidejűleg stabilizátorként és kromogénként is alkalmazható. Ebben az esetben mennyisége célszerűen 0,25—1,5 g/l, előnyösen kb. 0,5 g/l vizes oldat. Amennyiben egy másik kromogént, pl. o-dianizidint használunk, akkor az aziddal kombináltan elért stabilizáló hatáshoz jelentősen kevesebb Í3669 1
