163627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sertésondó mélyhűtéses konzerválására, felmelegítésére és inszeminálásra

163627 5 testhőmérsékletű oldatot kapunk, míg az ismert eljárásoknál a felmelegítés után az oldat hőmérséklete körülbelül 20 C°. Ugyancsak teljesen új a felmelegítésnél a találmány szerinti előhígítás elvégzése is, amelynek során az ondót csak kismértékben hígítjuk (körülbelül 1 ml 1 golyócskánál), új továbbá az az intézkedés is, hogy a felmelegítést egy az anyagcserét inaktiváló oldattal hajtjuk végre, és a végkoncentrációt a mobilizáló oldattal csak az uterusban állítjuk be. Ilyen módon az ondósejtek egészen a közvetlen felhasználás időpontjáig kevésbé mobil állapotban maradnak, ily módon kímélő körülmények között vannak, A találmány szerinti eljárásnál alkalmazásra kerülő háromféle oldat összetétele a fentebb megadottaktól természetesen eltérhet. Lényeges, hogy az inaktiváló oldat egy megfelelő pufferanyagot és d-glukozt, valamint egy komplexképzőt tartalmazzon. A mélyhűtő hígítónál fontos, hogy a tojássárga mennyiséget ne lépjük lényegesen túl. A harmadik oldat mobilizáló hatását az alkalmazott fokozott mennyiségű citrát segíti elő. Az oldatnak pufferanyagot is kell tartalmaznia és célszerűen szulfonamidot is adunk hozzá, hogy ilyen módon messzemenően biztosítsuk a csíramentességet. Mint már említettük az ondósejt oldatot 30 — 39 C° hőmérsékleten kell a koca uterusába bevinni. Az előbb leírtak szerint előállított oldatban levő ondósejtek életképessége ennél a hőmérsékletnél körülbelül 2 óra. A gyakorlatban azonban ez az idő túl rövid, mivel az ondósejteknek hosszabb időre van szükségük, amíg elérik a petevezetéket. A beadás és a petevezetékbe való behatolás között 4, kedvezőtlen esetben 7 óra is eltelhet. A találmány egy előnyös foganatosítási módja szerint az eljárásunk hatékonyságát oly módon fokozzuk, hogy az újra felolvasztott ondósejtek ellenállóképességét növeljük. Ezen túlmenően magát az eljárást egyszerűsítjük. A találmánynak ezt az előnyös foganatosítási módját az jellemzi, hogy az inaktiváláshoz és mobilizáláshoz (aktiváláshoz) ugyanazt az összetételű oldatot használjuk, míg a mélyhűtéshez olyan oldatot alkalmazunk, mely a fagyvédő anyagokon kívül nem tartalmaz további összetevőket. Az inaktiváláshoz és mobilizáláshoz használt oldat komplexképző és citrát mellett előnyösen glukózt, nátriumkarbonátot és antibiotikumokat, míg a centrifugált ondóhoz a mélyhűtés előtt adagolt mélyhűtő hígító, előnyösen soványtejport, glukózt, tojássárgáját, glicerint, antibiotikumokat, etiléndiamintetra-ecetsavat és káliumkloridot tartalmaz. Meglepő, előre nem várt eredménynek bizonyult, hogy az inaktiváláshoz és mobilizáláshoz ugyanaz az oldat használható. Ezáltal az egész eljárás lényegesen leegyszerűsödik. Csak egy oldatot kell előállítani és készleten tartani. Az összecserélés veszélye kizárt. Egy, a találmány szerinti eljárással elérhető még lényegesebb előny abban áll, hogy az ondósejtek mobilizált állapotban 39 C° hőmérsékleten legalább 4 óráig ellenállóak. A gyakorlati felhasználás során a találmány szerint előállított ondósejtoldatokat 6 óránál hosszabb ideig is 39 C° hőmérsékleten tartottuk, és az ondósejtek mozgékonysága még mindig cca 70% maradt. 6 Anélkül, hogy egy elméletet lehetne felállítani, feltételezhető, hogy az elért meglepő hatás lényegében arra vezethető vissza, hogy az ondósejtek az inaktiválás, mélyhűtés és mobilizálás során vizes 5 oldatokkal érintkeznek, amelyek ugyanazokat az összetevőket tartalmazzák. Az inaktivátorként és mobilizátorként alkalmazott oldat, amelyet továbbiakban „1. hígító"-ként jelölünk, továbbá a mélyhűtéshez előnyösen alkal-10 mázott oldat, a továbbiakban „2. hígító"-ként jelölve, összetételét a következőkben adjuk meg: 1. hígító (inaktiváló aktiváló oldat) 100—140 g, előnyösen 120 g Glukóz 15 10— 15 g, előnyösen 12 g Nátriuméitrát 1— 3 g, előnyösen 2 g Szulfonilamid 0,5— 3 g előnyösen l,5g Káliumklorid 1,5— 4 g, előnyösen 2,5 g Etiléndiamintetraecetsav 20 1,5— 4 g, előnyösen 2,5 g Nátriumkarbonát Antibiotikumok A fenti hígítót a következő módon állítjuk elő: 2 1 kétszer desztillált vizet felforralunk, a vegyi 25 anyagokat hozzáadjuk, rövid ideig forraljuk, majd hűlni hagyjuk, azután 1,7 millió N.E. penicillint, G nátriumot és 1,7 millió N.E. dihidrosztreptomicin bázist adunk hozzá és a pH értéket 4%-os NaOH hozzáadásával 6,8 értékre állítjuk be. A kész olda-30 tot leszűrjük. 2. hígító (mélyhűtő hígító) 100—120 g, előnyösen 100 g, Sovány tejpor 20— 30 g, előnyösen 25 g Glukóz 35 0,5— 3 g, előnyösen 1 g, Etiléndiamintetraecetsav 0,5— 1,5 g, előnyösen 0,8 g Káliumklorid Antibiotikumok Tojássárgája 40 Glicerin A mélyhűtő hígítót a következőképpen állítjuk elő: 1 1 kétszer desztillált vizet félforralunk, a vegyi 45 anyagokat hozzáadjuk, rövid ideig forraljuk, majd hűlni hagyjuk. A szobahőmérsékleten tartott oldathoz 1 millió N.E. penicillin G nátriumot, és 1 millió dihidrosztreptomicin bázist adunk hozzá. Ebből az oldatból 100 ml-t letöltünk és 18 ml tojássárgáját, 50 továbbá 6 ml glicerint adunk hozzá. A következőkben a találmány fentiekben említett előnyös foganatosítási módjának egy példaképpeni változatát írjuk le. A kandisznótól nyert ejakulátumot az inaktiváló-55 oldattal 1 rész ejakulátum 3 rész hígító arányban elkeverünk. A hígított ejakulátumot 80 ml befogadóképességű centrifuga üvegekbe töltjük és 24 óráig 15 C° hőmérsékleten ülepedni hagyjuk. Az ülepített ejakulátumot 1700 ford/perc fordulatszámmal 5 per-60 cig centrifugáljuk. A centrifugálás sebessége és időtartama nem kötött. Természetesen gyorsabb vagy lassabb centrifugálás is lehetséges, miközben a kisebb centrifugálási sebesség esetén a centrifugálás időtartamát kell megfelelően növelni. A centrifugá-65 lás után a centrifugált anyagot leöntjük és az üle-3