163539. lajstromszámú szabadalom • Eljárás száraz enzim-készítmények előállítására
163539 3 4 kationnal rendelkező sókkal nehezen oldódó vegyületeket képeznek, amelyek az oldószerrel végzett extrahálás után a készítmény aktivitását erősen lerontják, ezenkívül az aktivitás-hozam az egyértékű kationokkal elért eredményekhez képest lényegesen csökken. Olyan esetekben, amikor már eleve nagy a koncentráció a kétértékű kationra nézve, a találmány szerinti eljárás alapján a kétértékű kationból és az anionaktív szintetikus cserzőanyagból képződő, nehezen oldódó vegyület kiválását úgy kerüljük el, hogy a cserzőanyag bevitele előtt elegendő mennyiségben egyvegyértékű kationnal rendelkező sót adunk az elegyhez. A találmány értelmében száraz enzimkészítményeket állítunk elő az enzim mikrobás tenyészoldatokból Hl általános képletű, adott esetben szulfonált szintetikus cserzőanyagokkal - ahol m jelentése 3-10, előnyösen 3,4 vagy 6, n jelentése 0, 1, 2, vagy 3, o jelentése 1, 2 vagy 3, jelentése 0 vagy 1, —OH vagy -NH2 csoportot jelent, X jelentése -C(R)2-csoport, ahol R hidrogénatomot vagy metilcsoportot képvisel, továbbá —S02 —, -SO-, -S0 2NH- vagy -NH-csoport-, illetve abban az esetben, ha X jelentése olyan -C(R)2-csoport, amelyben R hidrogénatomot vagy metilcsoportot képvisel, a cserzőanyag naftol- vagy ligninszulfonsawal kondenzált, vagy to-szulfonált termékével enzim-cserzőanyag-addukt alakjában való lecsapása, a szerves sók és a cserzőanyag vízzel, illetve víz és szerves oldószerek elegyeivel való extrahálása és az enzim szárítása útján oly módon, hogy kedvezőtlen protein-só koncentráció arány esetén az enzim-cserzőanyag-addukt lecsapását anionos szintetikus cserzőanyagok alkalmazásakor egyértékű kationok, különösen NH4 + , K*, valamint Na + sóinak hozzáadásával és kationos szintetikus cserzőanyagok alkalmazásakor egyértékű anionok, különösen Cl", N03 ~, N0 2 ~, H2 P0 4 -, valamint F- sóinak hozzáadásával végezzük. Anionos szintetikus cserzőanyágként előnyösen krezolok és formaldehid polikondenzációs termékét használhatjuk nátriumhidrogénszulfit jelenlétében, a kationos cserzőanyagok példájaként megnevezzük az anilin és formaldehid polikondenzációs termékét. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa az aktív rész jól szűrhető csapadék alakjában való gyors lecsapása céljából Bacillus subtilis amilázt tartalmazó szűrt fermeszit levélből az oldathoz keverés közben 7,0 pH-értéken hozzáadjuk az I általános képletű anionos szintetikus cserzőanyagot 1,5 g/100 ml enzim-oldat mennyiségben, ahol a képletben m = 3. (A cserzőanyag krezolok és formaldehid NaHS03 jelenlétében készített polikondenzációs terméke.) A pH-értéket a szintetikus cserzőanyag hozzáadása előtt állítjuk be ismert módon, például a HCl vagy n NaOH segítségével. Ezután az oldatba szilárd alakban bekeverünk 100 ml enzim-oldatra számítva 6,0 g (NH4) 2 S0 4 -t. Két óra múlva a keverést leállítjuk, a csapadékot ismert módon centrifugáljuk, acetonnal mossuk és vákuumban szárítjuk. Az aktivitás-hozam 95,8%. 2. példa Az aktív rész jól szűrhető csapadék alakjában való gyors lecsapása céljából Aspergillus niger cellulózt tartalmazó szűrt ferment levéből az oldathoz 5,5 pH-értéken hozzáadjuk a II általános képletű kationos szintetikus cserzőanyagot 1,5 g/100 írd enzim-oldat mennyiségben vizes oldatban, ahol a képletben m = 3. (A cserzőanyag anilin és formaldehid polikondenzációs terméke.) Ezután az oldatba szilárd alakban bekeverünk 100 ml enzim-oldatra számítva 5,0 g NaN02 -t. Két óra múlva a keverést leállítjuk, a csapadékot ismert módon centrifugáljuk, acetonnal mossuk és vákuumban szárítjuk. Az aktivitás-hozam 73,4%. Az 1. és 2. példa szerinti módon eljárva egyéb enzimeket is lecsaphatunk. A táblázatban a további kiviteli példák paramétereit és a kapott eredményeket mutatjuk be. Szabadalmi igénypont Eljárás száraz enzim-készítmény előállítására az enzim mikrobás tenyészoldatokból III általános képletű, adott esetben szulfonált szintetikus cserzőanyagokkal — ahol m jelentése 3-10, előnyösen 3,4 vagy 6, n jelentése 0,1,2 vagy 3, o jelentése 1, 2 vagy 3, p jelentése 0 vagy 1, Y -OH vagy— NH2 csoportot jelent, X jelentése —C(R)2 -csoport, ahol R hidrogénatomot vagy metilcsoportot képvisel, továbbá —S02 —, -SO-, -S02NH- vagy -NH-csoport-, illetve abban az esetben, ha X jelentése olyan —C(R)2 -csoport, amelyben R hidrogénatomot vagy metilcsoportot képvisel, e cserzőanyag naftol- vagy ligninszulfonsawal kondenzált, vagy co-szulfonált termékével enzim-cserzőanyag-addukt alakjában való lecsapása, a szerves sók és a cserzőanyag vízzel, illetve víz és szerves oldószerek elegyeivel való extrahálása és az enzim szárítása útján, azzal jellemezve, hogy az enzim-cserzőanyag-addukt lecsapását anionos szintetikus cserzőanyagok alkalmazásakor egyértékű kationok, különösen NHf 4 , K\ valamint Na + sóinak hozzáadásával és kationos szintetikus cserzőanyagok alkalmazásakor egyértékű anionok, különösen Cl-, NO-3 , NO-2J H2 PO-4 , valamint F- sóinak hozzáadásával végezzük. 10 15 20 25 30 35 40 45 50
