163453. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-metil-delta3-cefem-4-karbonsav előállítására
13 163453 14 A koncentrátumot jéggel hűtjük, a csapadékot leszűrjük, kismennyiségű jeges vízzel, majd acetonnal mossuk, végül szárítjuk. 14,0 g (72,4%) fehér színű, 240—242 °C-on olvadó 7-ADCA-t kapunk. A terméket 2,5 n vizes nátriumhidroxid-oldatban oldjuk, a kapott oldatot aktív Szénnel derítjük, szűrjük, a szűrletet 6 n sósavoldattal pH = 3,7-re savanyítjuk, majd jéggel hűtjük. A kivált 7-ADCA-t leszűrjük, kismennyiségű jeges vízzel, majd acetonnal mossuk, végül szárítjuk. 11,4 g tisztított terméket kapunk. 10. példa A 9. példában leírt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy a 7-ADCA előállítására dezacilező enzim — celit adszorbátum helyett enzim — aktív szén, enzim — CM-Cellulose, illetve enzim — Amberlite CG—50 adszorbátumot használunk fel. Az egyes adszorbátumokat a 8. példában leírt módon állítjuk elő. Az eredményeket az alábbi táblázatban ismertetjük. kapunk (enzimtartalom: 5000 egység/g). A kapott adszorbátumot 120X900 mm méretű vinilklorid-osz-Hordozóanyag 7-ADCA mennyiség, g Hozam, % aktív szén CM-Cellulose Amberlite CG—50 37,5 32,9 31,3 58,2 51,8 48,5 11. példa Az 1. példában ismertetett módon tenyészetet állítunk elő. 1 liter így kapott tenyészetet 250 literes fermentorba töltünk, amely 200 liter, az 1. példában megadott összetételű táptalajt tartalmaz, és az elegyet 48 órán át 30 °C-on fermentáljuk. Két 250 literes fermentorból összesen 350 liter szűrt fermentlevet különítünk el. A szűrt fermentléhez 3,5 kg celitet adunk, és a kapott elegyet 30 percig keverjük. Ezalatt az elegy pH-ját 7-értéken tartjuk. A szilárd anyagot centrifugálással elkülönítjük, majd vízzel mossuk. 5,2 kg nedves celit-adszorbátumot 1 opba töltjük, és az oszlopon 5 mg/ml koncentrációjú, °,05 mólos foszfátpuffer-oldattal (pH =7,5) készített 5 7-fenilacetamido-3-metil-A3 -cefem-4-karbonsav-oldatot bocsátunk át. Az oszlop hőmérsékletét 37 °C-on tartjuk. Az oszlopon összesen 360 liter oldatot bocsátunk át, az áramlási sebességet 5 liter/óra értéken tartjuk. Az eluálás 72 órát vesz igénybe. A kapott 375 liter 10 efnuenshez 290 liter acetont adunk, a kapott elegyet 6n sósavoldattal pH = 4,0-re savanyítjuk, 30 percig erélyesen keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. A kivált csapadékot leszűrjük, acetonnal mossuk, majd szárítjuk. 1130,2 g 90,0 %-os tisztaságú kristályos 15 7-ADCA-t kapunk; hozam: 89,2%. Szabadalmi igénypontok 20 1. Eljárás a (II) képletű 7-amino-3-metil-A3-cefem-4-karbonsav előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű 7-fenilacetamido-3-metil-A3--cefem-4-karbonsavat — ahol R benzil- vagy fenoximetil-csoportot, és M vízoldható sót képező alkálifém-25 -atomot, célszerűen nátriumot és káliumot jelent — az (I) általános képletű vegyületek amid-kötését hasító enzimet termelő Bacillus megaterium B—400 FERM—P No. 748 törzs (deponálási szám: BIKOKEN 503) szűrt fermentlevével kezeljük, vagy az (I) általános képletű 30 vegyületeket vizes közegben a fenti enzimtermelő törzsből származó enzimkészítménnyel kezeljük, és a 7--amino-3-metil-A3 -cefem-4-karbonsavat elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 35 módja, azzal jellemezve, hogy az enzimtartalmú fermentlevet az enzimaktivitást fenntartó hordozóanyagon adszorbeáltatjuk, az enzim« hordozóanyag adszorbátumon az (I) általános képletű 7-fenil-acetamido-3-metil-A3-cefem-4-karbonsav vizes oldatát bocsátjuk át, 40 az enzimes kezelés 7—8 pH-n, 30—45 °C, célszerűen 35—40 °C hőmérsékleten végezzük és a kapott elegyből elkülönítjük a 7-amino-3-metil-A3 -cefem-4-karbonsavat. 1 lap rajz Á kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 75.3494.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 7
