163419. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy antibiotikum előállítására
163419 Brómozás kloroformban Brómozás vízben Optikai forgatóképesség negatív csapadékképződés sav keletkezése miatt. 4 1. táblázat Mg • - 60° (1 %-os metanolos oldatban). Olvadáspont Az antibiotikumnak nincs éles olvadáspontja vagy olvadástartománya. 135 °C-on gázfejlődés indul meg, és az antibiotikum meglágyul. Körülbelül 152 °C-on ismét gáz képződik. 164—174 °C-on az antibiotikum olvadt állapotú. Ultraibolya spektrum Az antibiotikumnak 233, 276, 286 és 327 nm hullámhosszaknál maximumot mutató jellegzetes spektruma van. Különböző pH értékeknél különböző spektrumokat kapunk, amint a rajzmelléklet 1. ábráján látható. Ezen az ábrán az összefüggő vonal az antibiotikumnak 1: 1 arányú metanol—víz elegyben készült 13 mg/liter koncentrációjú oldatára vonatkozik; a szaggatott vonal hasonló oldatot jelent azzal a különbséggel, hogy a vizet 0,5 n nátriumhidroxid oldat helyettesíti; a pontozott vonal hasonló oldatot jelent azzal a különbséggel, hogy a vizet 0,5 n sósav helyettesíti. Az antibiotikum vékonyréteg-kromatogramja azt mutatja, hogy az antibiotikum három vegyületből áll, ezek valószínűleg egyensúlyban vannak. A 12 rész aceton, 8 rész etilacetát és 1 rész víz elegyével szilikagél alapon kifejlesztett kromatogram a 2. ábrán látható, a szaggatott vonal az indulást jelenti. Infravörös spektrum 10 15 20 25 30 35 Az antibiotikum infravörös spektruma a 3. ábrán látható. A főbb abszorpciós sávok 810, 860, 940, 980, 1090, 1215, 1355, 1455, 1540, 1650, 2930, 2970, 3400 40 cm_1 -nél vannak. Elemanalizis A talált átlagértékek a következők: 45 C 63,8, H 7,6%, N 3,5%, O (a különbségből) 25,1%. Molekulasúly A molekulasúlyt izoterm desztillációval határoztuk 50 meg. Két oldatot — ezek közül az egyik az antibiotikum acetonos oldata, a másik (vonatkoztatásul) azobenzol acetonos oldata volt — elkülönítetten behelyeztünk zárt és evakuált rendszerbe. Az oldatok fölötti gáznyomás különbsége miatt a gőz addig mozog, amíg egyen- 55 súlyi helyzetet nem ér el; ilyenkor az oldatok molaritása egyenlő. A kísérletet 23 °C állandó hőmérsékleten hajtottuk végre. Az antibiotikum számított molekulasúlya 714 volt. Az antibiotikumnak 50%-os vizes metilalkohollal készült oldatát 0,1 n nátriumhidroxid oldattal 60 titrálva a közömbösítési egyenértéket 817-nek találtuk. Az antibiotikum készítmény mikrobiológiai hatásosságát számos mikroorganizmussal szemben hagyományos hígításos módszerrel határoztuk meg. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. Ebben a táblázat- 65 Legkisebb gátló konMikroorganizmus centráció /ig/ml Bacillus subtilis ATCC 6633 5 Bacillus cereus ATCC 9139 0,3 Staphylococcus aureus A 55 (ATCC 6538P) 25 Staphylococcus aureus A 321 50 Staphylococcus aureus A 355' >100 Staphylococcus aureus L 160a' >100 Streptococcus haemolyticus A 266 >100 Streptococcus faecalis L'80 >100 Micrococcus flavus A 54 25 Sarcina lutea ATCC 9341 25 Brucella melitensis A 488 1,5 Pasteurella multocida A 723 25 Salmonella dublin P 43 =-100 Escherichia coli U 20 >100 Escherichia coli M >100 Erwinia carotovora W 9 25 Pseudomonas aeruginosa L 94 >100 Pseudomonas aeruginosa 2396" >100 Proteus rettgeri A 821 50 Proteus mirabilis H 3 50 Proteus mirabilis L 93 >100 Proteus morganii 2241" 50 Haemophilus influenzae A 773 4 Actinobacillus equuli T 3 1,5 Candida albicans A 7 >100 Candida parapsilosis A 952 >100 Torulopsis glabrata A 420 >100 Saccharomyces cerevisiae D 160 >100 Trichophyton mentagrophytes R 177 >100 Aspergillus niger D 184 >100 Lactobacillus acidophilus D 218 >100 Clostridium welchii A 738 15 Streptococcus agalactiae A 732 15 Streptococcus disgalactiae A 730 15 Mycoplasma gallisepticum K 514 kb. 0,1 ban („penicillinázt termelő törzset és") újabban izolált kórházi törzset jelent. A táblázat adataiból kitűnik, hogy az antibiotikum nagyon hatásos Mycoplasma galMsepticum ellen, de majdnem teljesen hatástalan számos, emberre patogén mikroorganizmussal szemben, Mycoplasma gallisepticummal szemben in vivo hatástalan. Az antibiotikum toxicitását különféle állatokon tanulmányoztuk. Az akut toxicitás nagyon csekély; a testsúly kilogrammonkénti 1000 mg-os adag az egereket nem öli meg; patkányoknak és csirkéknek a táplálékkal 0,1% koncentrációban két hónapig orálisan adagolva, semmi nemkívánatos gyógyszerhatás nem mutatkozott. A találmány szerinti új antibiotikumot az állatállomány, például szarvasmarhák, sertések, szárnyasok növekedését elősegítő szerként különösen hasznosnak találtuk. A növekedést elősegítő szert a szokásos módon, például az állati táplálék adalékanyagaként lehet beadni. Az antibiotikumnak bizonyos bél-mikroorganizmusok, 2
