163335. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-terminális L-prolilcsoporttal szubsztituált inzulinok és származékaik előállítására
163335 a) 450 kg injekcióra alkalmas vizet beöntünk egy keverőtartályba. Hozzáadunk 8000 g glicerint, 500 ml 100%-os desztillált fenolt és 500 ml n sósavat. Ezután hozzáadunk 850 ml cinkklorid-oldatot (200 mg/ml cink), és az oldatot jól átkeverjük. Hozzáadunk 3400 g ciníc-Ncj-L-prolil-inzulint és 1000 g protaminszulfátot, és a keveréket összekeverjük. Kellő mennyiségű n sósav hozzáadásával a keverék pH-ját 2,9—3,0-ra állítjuk be, mire oldat keletkezik. Az oldatot injekcióra alkalmas vízzel kiegészítjük 500 literre, nyomás alatt való szűréssel sterilizáljuk, és a protamin-Nw-L-prolil-inzulin-oldatot 20 literes palackokba töltjük. b) 500 kg injekcióra alkalmas vizet töltünk egy keverőtartályba. Hozzáadunk 2200 g vízmentes dinátriumhidrogénfoszfátot, 8800 g glicerint és 2200 ml 100%-os fenolt, és az oldatot összekeverjük. Ezután injekcióra alkalmas vízzel feltöltjük 550 literre. A kapott oldat pH-ját úgy állítjuk be, hogy egyenlő térfogatú protamin-cink-I^prolÜinzulin-oldattal keverve a pH-ja 2,9—3,0 legyen. Ezt vagy n sósavval, vagy n nátronlúggal végezzük. Az így kapott pufferoldatot azután nyomás alatt szűréssel sterilizáljuk, és 20 literes palackokba töltjük. c) 10 ml-es ampullákat gépen megtoltunk 5 ml steril protamin-cink-L-prolilinzulin-oldattal. 7. példa Nej- L-prolil-inzulin 500 liter Ncj-L-prolilinzulin-oldat előállítására a következőképpen járunk el: a) 200 liter injekcióra alkalmas vizet töltünk egy keverőtartályba, hozzáadunk 4000 g glicerint, 375 g frissen desztillált metakrezolt, 162,5 ml 100%-os frissen desztillált fenolt, és 250 ml n sósavat, és az oldatot jól összekeverjük. Hozzákeverünk 6 g cinket tartalmazó 30 ml cinkklorid-oldatot, majd hozzáadunk 1700 g cink-Nou-Lprolil-inzulint és 168 g protamin-szulfátot, és a kapott oldatot összekeverjük, majd n sósavval az oldat pH-ját 2,7—3,0-ra állítjuk be a szilárd anyagok feloldására. Ezután injekcióra alkalmas vízzel feltöltjük 245 kg-ra, és n sósavval beállítjuk az oldat pH-ját 2,7-3,0-ra. Végül injekcióra alkalmas vízzel feltöltjük 250 literre. Az oldatot szűréssel nyomás alatt sterilizáljuk. b) 200 liter vizet töltünk egy keverőtartályba. Hozzáadunk 1400 g dinátriumhidrogénfoszfátot, 5600 g glicerint, 525 g frissen desztillált metakrezolt és 227,5 g 100%os desztillált fenolt, és az oldatot összekeverjük. Injekcióra alkalmas vízzel feltöltjük 250 kg-ra. A pufferoldat pH-ját úgy állítjuk be, hogy 5 egyenlő mennyiségű a) szakaszban készült oldattal keverve a pH-ja 2,7—3,0 legyen. Erre a célra n sósavat vagy n nátronlúgot használunk. Ezután az oldatot nyomás alatt való szűréssel sterilizáljuk. c) 10 ml-es ampullákat megtoltunk 5 ml a b) szakaszban kapott steril pufferoldattal és 5 ml az a) szakaszban kapott steril Ncj-L-prolil-inzulin-protamin-cinkoldattal. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Nw -(L-prolil)-inzulin és di-[Nco-(L-prolil)]-inzulin, valamint N-terc-butiloxikarbonil-csoporttal védett alakjaik és cink- és alkalikus proteinkomplexeiknek a vizes oldatai előállítására azzal jellemezve, hogy inzulint legfeljebb háromszoros, illetve legalább ötszörös mennyiségű (N-terc-butiloxikarbonil-L-prolin)-p-nitrofenilészterrel acilezünk, majd adott esetben az N-terc-butiloxikarbonil-védőcsoportot ismert módon eltávolítjuk, majd kívánság esetén az így kapott terméket ismert módon vizes oldatban egy cinksóval és egy alkalikus proteinnel kezelünk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja Nco-(N-terc-butiloxikarbonil-L-prolil)-inzulin vagy di-[Ncj-(N-terc-butiloxikarbonil-L-prolil)]-inzulin előállítására azzal jellemezve, hogy inzulint (N-terc-butiloxikarbonü-L-prolin)-p-nitrofenilészterrel acilezünk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja Nco-(L-prolil)-inzulin előállítására azzal jellemezve, hogy Nco-(N-terc-bu.tiloxikarbonil-L-prolü)-inzulihnak ismert módon, előnyösen trifluorecetsavval, eltávolítjuk a védőcscportját. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja di-[Nor(L-prolil)]-inzulin előállítására azzal jellemezve, hogy di-[Ncj-(N-terc-butiloxikarbonil-L-prolil)]-inzulinnak ismert módon, előnyösen trifluorecetsavval, eltávolítjuk a védőcsoportját. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy Nw -(L-prolil)-inzulint egy cinksóval és egy alkalikus proteinnel kezelünk. 15 20 25 30 35 40 4 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. OK1SZ Labor 13-0777-Ny/74
