163221. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav előállítására

163221 11 12 lítjuk be és az acilezett táptalajt fele mennyiségű MIBK-nal extraháljuk. A MIBK-fázist vízzel mossuk, majd vákuumban 36 °C-on kezdeti térfogatának kb. Vs-ára koncentráljuk be. A koncentrátum víztartalma kb. 0,2% (Kari Fischer módszere szerint). A koncentrátumot lehűtjük és pH 4,8-ig MIBK-os nátriumetilhexanoát-oldatot adunk hozzá. Az N-karboizobutoxi-cefalosporin C nátriumsója kicsapódik és ezt szűréssel elválasztjuk. A csapadékot MIBK-nal mossuk, petroléterrel felszuszpendáljuk, szűrjük és vákuumban 40—60 °C-on szárítva 7,2 kg terméket kapunk. A használt táptalajt mérve 1%-nál kisebb cefalosporin C aktivitást találunk. Az elválasztott termék kb. 42— 50% tiszta N-karboizobutoxi-cefalosporin C nátriumsó. A termék kielégítően tiszta a következő 7-amino-cefalosporánsav előállításra. Az eredeti fermentlé aktivitásának kb. 46—52%-át nyerjük vissza. 2. példa 7-amino-cefalosporánsav előállítása: Az 1. példában nyert N-karboizobutoxi-cefalosporin C nátriumsójának 13,5 g-ját, 1,45 ml metilénkloridot, 3,0 ml dimetilanilint és 3,67 ml trietilamint elegyítünk. Keverés közben 28 °C-on 6,2 ml diklórdimetilszilánt adunk hozzá. Az oldatot 40 percig keverjük. Az oldatot ezután —60 c

C-ra hűtjük és 12 g foszforpentaklorid 100 ml metilénkloridos oldatát adjuk hozzá. További 11,0 g dimetilanilint adunk hozzá, miközben a reakció hőmérsékletét —40 °C alatt tartjuk. A hőmérsékletet 2 óra múlva —73 °C-ra csökkentjük és 60 ml metanol és 2,5 ml dimetilanilin —78 °C-ra hűtött elegyét adjuk hozzá. A hőmérséklet —45 °C-ra emelkedik. Az elegyet keverjük és —50 °C-ra hűtjük vissza. Két óra múlva 55 ml 90 °C-os vizet adunk hozzá, így a hőmérséklet +3 c

C-ra emelkedik. Az elegyet jégfürdőn hűtve 4 percig keverjük. 22 ml ammóniumhidroxidot adunk az oldathoz 8 perc alatt, 3,7 pH-értékig. Az elegyet néhány órán át keverjük, majd szűrjük. A csapadékot elválasztjuk, 50 ml metilénkloriddal, azután 40 ml vízzel, majd 50 ml metanollal, végül 50 ml acetonnal mossuk. Az anyagot szárítva 2,25 g 92,5% 7-ACA keletkezik. 3. példa Az N-karboizobutoxi-cefalosporin C nátriumsójának ,,in situ" előállítása: Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott alkalmazott 5,9 : 1 halogénhangyasav-izobutilészter : cefalosporin C mólarány helyett 4,5 : 1 mólarányt alkalmazva 10,4 kg termék keletkezik, mely 31— 35% tisztaságú. A használt táptalaj extrakció utáni mérése 14%-nál kevesebb cefalosporin C aktivitást mutat. A kiindulási fermentlé aktivitásának 53%-át nyerjük ki. 4. példa 7-amino-cefalosporánsav előállítása: A 3. példa szerint kapott N-karboizobutoxi-5 -cefalosporin C nátriumsójának 13,5 g-ját, 50 ml metilénkloridot, 3 ml dimetilanilint és 3,67 ml trietilamint elegyítünk. Keverés közben 25—29 °C hőmérsékleten 6,2 ml diklórdimetilszilánt adunk hozzá. Az oldatot 30 percig keverjük, 10 majd —60 °C-ra hűtjük és 12,0 g foszforpenta^ klorid 100 ml metilénkloridos oldatát adjuk hozzá. A hőmérsékletet 2 órán át —40 °C-on tartjuk. Az oldatot —7ß °C-ra hűtjük és 60 ml metanol és 2,5 ml dimetilanilin —78 °C-ra hűtött 15 elegyét adjuk hozzá. A hőmérséklet —46 °C-ra emelkedik, majd 2 órán át —415 és —50 °C között tartjuk az elegyet. 5öi ml 95 °C-os vizet öntünk hozzá keverés közben, így a hőmérséklet +5 °C lesz. 4 perces keverés után (pH = 0,2) 22 20 ml ammóniumhidroxidot adunk hozzá 7 perc alatt, pH 3,8i-ig. A keverést néhány napig hűtés közben tovább folytatjuk. A 7-ACA csapadékot szűréssel elválasztjuk. 50 ml metilénkloriddal, azután 40 ml vízzel, majd 50 ml metanollal, vé-25 gül 50 ml acetonnal mossuk. A szárított anyag súlya 2,3 g, 9i5,4%-ban 7-ACA. 5. példa 30 Az N-karbetoxi-cefalosporin C nátriumsójának „in situ" előállítása: Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott alkalmazott halogénhangyasav-izobutilészter : cefalosporin C 35 5,9 :

1 mólarány helyett 7,0 :1 halogénhangyasav-etilészter : cefalosporin C mólarányt alkalmazva az N-karbetoxi-cefalosporin C nátriumsóját állítjuk elő. Kitermelés: az eredeti aktivitás 48—55%-a. 40 6. példa 7-ACA előállítása N-karbetoxi-cefalosporin C nátriumsóból: 45 500 ml-es lombikba 12,0 g N-karbetoxi-cefalosporin C nátriumsót, 45i ml metilénkloridot, 3,47 ml trimetilamint és 7,0 ml N,N-dimetilanilint adagolunk. A szuszpenziót keverjük, és 4,75 ml diklórdimetilszilánt csepegtetünk hozzá 50 25—28 °C-on. A reakcióelegyet 45 percig kb. 25 °C-on tartjuk, majd —60 °C-ra hűtjük és 10,8 g foszforpentaklorid (0,052 mól) 100 ml metilénkloridos oldatát adjuk hozzá olyan mértékben hogy a hőmérsékletet —40 °C alatt tartsuk. Ez1 55 követően a hőmérsékletet —40 °C-on tartva 11,*] ml N,N-dimetilanilint adagolunk hozzá. A reakcióelegyet —7í3 °C-ra hűtjük és 60 ml, 2,36 vei N,N-dimetilanilint tartalmazó metanol —78 "C-n hűtött oldatát öntjük hozzá gyorsan. A hőmér-60 séklet —43 °C-ra emelkedik, ezért az elegye —50 °C-ra hűtjük és 2 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. 45 ml 65 °C-os vizet adunk ezutár a reakcióelegyhez, majd +5 °C-ra melegítjük é; 4 percig keverjük. A pH = 0. Kb. 6 perc alat 65 10 ml tömény ammóniumhidroxid-oldatot adunl