163157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy polipeptid előállítására
163157 ja 49° r i20 : —19° <c=l, etanolban). Ezt a vegyületet 750' ml 4 n sósav és etanol elegyében oldjuk, az oldatot 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, bepároljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és állandó súlyig szárítjuk. Az a) alatt megnevezett vegyületet kapjuk olaj alakjában. b) BOC-Ser-Gly-OEt 12,5 g BOC-Ser-OH-t 100 ml kloroformban oldunk, és hozzáadunk 6,1 g N-metilmorfolint, majd hozzácsepegtetünk 8,2 g klórhangyasav-izobutilésztert. 10 perccel később hozzáadjuk 6,6 g glicin-etilészternek 50 ml kloroformmal készült oldatát, és szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. A reakciőkeveréket híg ammóniaoldattal, majd híg sósavval mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, és a szerves fázist bepároljuk. A b) alatt megnevezett vegyületet kapjuk olaj alakjá-20 ban; [a]D =—3° (c=l, dimetilformamidban). c) BOC-Ser-Gly-NHNH2 19,4 g BOC-Ser-Gly-OEt-t feloldunk 270 ml etilalkoholban, hozzáadunk 48,6 ml hidrazinhidrátot, és 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakciókeveréket bepároljuk, és a maradékot metilalkohol és dietiléter 1:3 arányú elegyéből átkristályosítjuk. A c) alatt megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 157°; 20 [ct]n =—5° (c=l, dimetilformamidban). d) BOC-Ser-Gly-Met-Gly-OEt 200 ml dimetilformamidhoz hozzáadunk 25 ml etiléteres 4 n hidrogénklorid-oldatot, és a kapott oldatban —10°-on feloldunk 11 g BOC-Ser-Gly-NHNH2 -t. Ezután — 10°-on 5,4 ml terc-butilnitritet csepegtetünk hozzá, majd hozzáadunk előbb 18 ml trietilammt, utána 12 g H-Met-Gly-OEt-HCl-nek 100 ml dimetilformamiddal készült oldatát és 6,2 ml trietilamint. Szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, 12 óra múlva leszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. A maradékot kloroformban oldjuk, híg ammóniaoldattal, majd híg sósavval mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. A d) alatt megnevezett vegyületet 20 kapjuk; [a ] D = —1 4 ° (c=l, dimetilformamidban). 8 20 20 25 30 55 e) B peptidfragmens 24 g BOC-Ser-Gly-Met-Gly-OEt-t feloldunk 250 ml dioxánban, hozzáadunk 75 ml n nátronlúgot, 1 óra hosszat 25°-on keverjük, 150 ml Dowex-50 (H+-fázis) ionkicserélővel kezeljük, leszűrjük, a szüredéket bepároljuk, és a maradékot etilacetát és dietiléter elegyéből átkristályosítjuk. A B peptidfragmenst kapjuk. Olvadáspontja 87° (bomlik); [a]D =—17° (c=l, dimetilformamidban). 5 C peptidfragmepis: Trt-His(Trt)-Arg-Phe-NH-NH2. HCl a) Z-Arg(N02 )-Phe-OMe 51,8 g H-Phe-OMe. HCl-t feloldunk 1 liter 10 dietiléter és 50 ml jeges víz keverékében, és keverés és hűtés közben annyi nátriumkarbonátot adunk hozzá, hogy az az egész vizet lekösse. A reakciókeveréket szűrőre visszük, a szüredéket állandó térfogatig bepároljuk, mire színtelen ola-15 jat kapunk. 67,6 g Z-Arg(N02 )-OH-t 300 ml acetonitril és 150 ml dimetilformamid elegyében oldunk, és hozzáadunk 41,2 g H-Phe-OMe-t. Ezután —20°ra hűtjük, és hozzáadjuk 43,4 g diciklohexilkarbodiimidnek 100 ml acetonitrillel készült oldatát. A reakciőkeveréket időnként felrázva 4 óra hosszat hűtőszekrényben állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot szűrőn elválasztjuk, és a szüredéket bepároljuk. A maradékot 1 liter etilacetátban oldjuk, majd hidegen n nátronlúggal, vízzel, n kénsawal, vízzel és telített nátriumklorid-oldattal mossuk. A nátriumszulfát fölött megszárított etilacetátos fázist teljesen bepároljuk. Etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítva az a) alatt megnevezett vegyületet kapjuk. Olva-20 dáspontja 131—133°; [a]D = —7° (c=l, metanolban) és —4° (c=l, dimetilformamidban). b) H-Arg(N02 )-Phe-OMe . 0,5H2 O . l,2HBr 20 g Z-Arg(N02 )-Phe-OMe-t feloldunk 50 ml jégecetben, és enyhe hűtés közben hozzáadunk 40 50 ml 40%-os jégeoetes hidrogénbromid-oldatot. Ezután a reakciókeveréket időnként felrázva 1 óra hosszat 20°-on állni hagyjuk. Teljes bepárlás után a maradékot 200 ml vízben oldjuk, és 2 ízben dietiléterrel mossuk. A vizes fázist bepárol-45 juk, és a száraz maradékot metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítjuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 165—167° 20 (bomlik); [a]D =+i8° (c=l, metanolban) és 50 +14° (c=l, dimetilformamidban). c) Z-His(Z)-Arg(N02 )-Phe-OMe 46,1 g H-Arg(NO2 )-Phe-OMe.0,5H 2 O.l,2HBrot 100 ml vízben oldunk, az oldatot felmelegítjük, majd lehűtjük. Kloroform és jég hozzáadása után a keverék pH-ját ammóniával beállítjuk 9-re. A kloroformos fázist vízzel mossuk, nátriumkarbonáton szárítjuk, és leszűrjük. A szüredékhez hozzáadjuk 44,5 g Z-His(Z)-OH-nak és 12,1 g N-hidroxiszukcinimidnek 200 ml aoetonitrillel és 100 ml piridinnel készült oldatát, —20°-ra hűtjük, és hozzáadjuk 21,1 g diciklohexilkarbodiimidnek 70 ml acetonitrillel készült oldatát. 35 60 65
