162973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás detoxofikált bakteriális endotoxin készítmény (sugár-endotoxoid) előállítására
162973 6 A fenti kísérletek egyértelműen bizonyítják, hogy a sugárdetoxifikált endotoxin alkalmas a természetes ellenállóképesség veszélymentes fokozására. A találmány jelentősége abban rejlik, hogy az eddigi kémiai detoxjfikálási eljárásoknál sakkal egyszerűbb, jobban reprodukálható módszerrel olyan preparátumot állít elő, mely alkalmazása esetén lehetővé teszi, hogy a szervezetet teljesen veszélytelen módon, igen rövid idő alatt, fokozott természetes ellenállóképességgel ruházzuk fel. Laboratóriumi egereken, patkányokon, valamint gyakorlati körülmények között választott malacokon végzett toxicitási vizsgálataink bizonyítják, hogy a készítmény a találmány szerinti kivitelben és dozirozásban teljesen veszélytelen és már 24 óra múlva 90—100%-os védelmet nyújt halálos endotoxin sokkot kiváltó endotoxin dózissal szemben (a kontroll állatok 100 %-ban elhullanak). Ezt szemlélteti a következő táblázat. IV. táblázat Natív és sugárdetoxifikált endotoxin preparátumok LD50 értékei patkányokban: Preparátum LD50* E. coli endotoxin 20 mg/kg E. coli sugárdetoxifikált endotoxin 100 mg/kg Serratis marcescens endotoxin 40 mg/kg Serratis marcescens sugárdetoxifikált endotoxin 100 mg/kg A találmány szerinti eljárás kiviteli módja a következő: Escherichia coli (patológiás esetből) kitenyész-5 tett törzsét fermentorban elszaporítjuk, centrifugában többször mossuk, majd szárazanyagtartalom alapján kiszámított és hígított szuszpenziójából Westphal, Lüderitz és Bister (Z. Naturforsch. 1952 76; 148) általunk módosított l° meleg-ifenol-vizes eljárásával bakteriális lipopcliszacharid endotoxint állítunk elő. Az endotoxint por alakban vagy célszerűen 10 mg/ml-es vizes szuszpenzió formájában, jeges hűtéssel ellátva helyezzük el a kobalt-60-15 -gamma sugárforrás (Noratom) kabinjába, ahol 3—6 Mrad (vizes szuszpenzió esetében célszerűen 4,5 Mrad, por esetében 6 Mrad) sugárdózist biztosítunk. Az így kezelt termék steril és vizes szuszpenzió esetén közvetlenül alkal-20 mas liofilizálásra, ill. dozirozásra. A találmány szerint előállított termék (sugárendotoxoid) gyakorlati felhasználása úgy történik, hogy a liofilezett anyagot steril fiziológiás konyhasó oldatban oldjuk, majd intravénásán, 25 intraperitoneálisan vagy intramuscularisan (de nem subcutan) befecskendezzük. Az eljárás többször minden veszély nélkül megismételhető. A találmány szerint előállított termék dózisa 30 választott malacok esetében, az ödéma betegség megelőzésére, közvetlenül a választás előtti napon, esetleg ismételve 1—2 mg, (2—4 ml fiziológiás konyhasó oldatban), malaconként (célszerűen 0,1—0,2 mg/kg) intraperitoneálisan. Na-35 gyobb sertések esetében más célból (pl. szállítás előtt 24 órával, stb.) 0,05 mg/kg a dózis. Házi szárnyasokon stress állapotok megelőzésére a számított behatás előtt legalább 24 40 órával vagy előbb és ismételve 0,1—0,2 mg/kg dózisban alkalmazható. A leírásban E. coli-ból előállított endotoxin szerepel, de mai ismereteink szerint bármely Gram-negatív baktérium alkalmas endotoxin, és így sugárdetoxifikált endotoxin előállítására, mert a különböző Gram-negatív baktériumokból előállított endotoxinok farmakológiai hatásában nincs különbség. A Gram-negatív baktériumok bármelyikéből hatásos endotoxint lehet kivonni. Az endotoxinok hatásában nincs különbség, amint ezt Alföldi—Ivánovics—Rauss „Orvosi Mikrobiológia és Immunitástan" című könyv (Medicina, Bp. 1967) 128. oldalán is olvasható. Tehát bármely Gram-negatív baktériumból készült endotoxin detoxilfíkálható a találmány szerinti módon, így pl. az Escherichia coli, Serratia marcescens. A detoxiifikált készítmény bármely oltóanyaggal keverhető vagy társítható, például baromfipestis vakcinához, baromi ikolera-vakcinához, lépfene-vakcinához stb. A hatóanyag a társítás következtében adjuváló hatást vagy a vakcina oltási negatív fázist csökkentő hatást, természetes ellenállóképesség növekedést eredményez. Más háziállat-fajokban átlagosan 0,006—0,05 mg/kg dózisban alkalmazható, azzal a meg-45 jegyzéssel, hogy nagyobb testsulyú állatok esetében a kisebb dózis elegendő. így kifejlett szarvasmarha esetében a dózis nem haladja meg az 1—2 mg-ot. Nagyobb állatok esetében célszerű a terméket nagyobb térfogatban alkal-50 mázni. • Embereken a várt káros behatás (műtét, sugárhatás, stb. fertőzési veszély, stb.) előtt legalább 24 órával vagy előbb, esetleg több alkalommal a kezelőorvos által megállapított dó-55 z ishan alkalmazható. 60 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás detoxifikált bakteriális endotoxin készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy Gram-negatív baktériumból készült, előnyösen tisztítatlan vagy tisztított endotoxint porban vagy vizes szuszpenzióban 3—6 Mrad ionizáló 65 sugárdózissal besugárzunk és a detoxifikált bak-3
