162875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tirozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó peptidek előállítására

3 162875 4 nos módon történik. Az új vegyületek egy-egy adagja változhat 10"5 és 10 -7 mg/kg testsúly között. A találmány szerinti eljárással készült új pep­tidek sókká is átalakíthatók. Ilyen sók például a hidroklorid, hidrobromid, acetát, fluoracetát (például itrifluoracetát), klóraoetát (például di­klóracetát), továbbá ammóniumsók, minit a di­ciklohexilammóniuniisó, trietilammórúumsó, níor­foliniumsó, piridiniumsó, továbbá fémkationo­kat tartalmazó sók, például a nátrium-, kálium­vagy magnéziumsók. A találmány szerinti eljárással előállítható aminosavkombinációk közül a leghaitásoabbnak bizonyult a terc-bútoxikarbonil-L^aszpargil-O­-O-szulfáto-I^tirozil-L-metionil-glicil-L-triptofil­-L-métibnil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid ! (1. példa). A találmány értelmében :az új pepitidek és az előállításuk során használit közbülső termékek a peptidkémiában ismert módszerek szerint; ál­líthatók elő, például egyes aminosavaknak lé­pésre való kapcsolásiával vagy aminosavcsopor­tok kapcsolásával. Rpnt ismeretes, ez úgy tör­ténik, hogy az aminosav vagy aminocsoport aminoGsoportjáit megvédjük, például benzilioxi­karboiul-származékká való átalakítással, majd az ilyen aminosav vágy aminosavcsoport karb­oxilcsoportját aktiváljuk, például nitrofenil­észter származékává való átalakításával. Az ilyen védett és aktivált közbülső terméket az­után egy szabad aminocsopontot tartalmazó má­sik aminosavval vagy aminosavcsoporttal rea­gáltatjuk, ily módon meghosszabbítva a peptid­láncot. Alkalmas aikjtíváló csoportok például az ami­nosav savfunkcióját reaktívabbá tevő kombi­nációk vagy csoportok, mint a vegyües anhid­ridek, azidok, savkloridok, karbodiimidek reak­ciótermékei, reakcióképes' N-acilvegyületek, O­-acil-hidroxilamin-^származékok és aktív észte­rek, mint az elektronbefogó (negatív) szubsz­tiituenseket tartalmazó alkilészterek, vinilészfe­rek, enolészterek, fenilészterek, tiofenilészterek, niitrofenilészterek, . 2,4-dinitrofenilésziberek, tri­klórfenilészterefc és nitrofeniltiolészterek. A nitroferíilészterek használata különösen előnyös a hozam, melléktermékeik hiánya és ennélfogva a könnyű tisztíthatóság szempontjából. Peptidsorozatoknak a találmány szerinti létre­hozása során az aminofunkciók megvédbetők az e célra használatos védőosoportokkal, mint a benziloxikiarbonil-, nitrobenzükarbonil-, metoxi­benzilkarbonil-, iterc-butoxikarbonil-, ftalil-, o­-nitrofenilszulfonil-, tozil- és hasonló csoportok. A karbonilcsoporitok megvédésére metil-, etil-, terc.-butil-, benzil-, nitrobanzil-, trimetilbenzil-és hasonló csoportok használhatók. A hidroxil­csopomtok megvédhetők benzil-, terc-butil-, tatrahidropiranil- és hasonló csoportokkal. A védőcsoportok ismert reakciókkal távolít­hatók el, ilyenek a nátriummal cseppfolyós ammóniában végzett redukció, hidrogénezés (pl. palládiumszén katalizátor jelenlétében), hidro­génhalogeniddel (pl. hidrogén bromiddal vagy sósavval) való kezelés ecetsavban vagy trifluor-5 ecetsavas kezelés. A szabad aminők előállítására ecetsavban való hidrogénhalogenides kezelés után a hidro­bromid sót egy ioncserélő gyantával, például Amberlite IR 400-zal hozzuk érintkezésbe, vagy 10 egy bázissal, például trietilaminnal közömbö­sítjük. Ha a kívánt pepetidsorozat létrejött, annak tirozin részét szulfatáljuk piridinnkéntfíoxid komplexszel való kezeléssel, és így a itirozin-O-15 -szulfátot tartalmazó peptidekhez jutunk. Egy csoportnak, amilyen a tirozin-rész, a szulfatálása piridin-kéntrioxid komplexszel való kezeléssel jól ismert művelet. 20 A szulfatálásit piridinnkéntrioxid komplexszel előnyösen úgy végezzük, hogy a pepiidet egy iners oldószerben, például dimetilformamidban oldjuk, piridint adunk hozzá, majd hozzáadjuk a piridHukéntr-ioxid komplexnek egy iners oldó-25 szerrel, például piridinnel készült oldatát. Szo­bahőmérsékleten állni hagyva létrejön a tirozin­-O-szulfát-származék, és az vákuumban való bepárlás és a maradóknak vízzel való mosása után a szokásos módon elkülöníthető. A peptid 30 aiminofunkcióját a szulfatálás közben védeni kell, például egy védőcsoporttal, mint a terc­-butiloxikarbonilcsoport; ez utóbb hagyományos módon, például tmfluorecetsavval eltávolítható. A szulf atált tennék ek sói a szulf atált fermék-38 nek a megfelelő savval,, aminnal vagy fémes kationnal való reagáltatásával állíthatók elő. 1. példa:" 40 terc-Butoxikarbonil-L-aszparagil-Ö^szulfáto-L­-tirozil-L-metionil-gilicil-L-!triptofil-L-metionil­-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 45 350 mg (0,3 mmól) terc-butoxikarbonil-L­-aszparagil-L-tirozil-L-metionil-glicil-L-triptofil^ -L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amidot feloldunk 18 ml vízmentes dimetilformaimid és 18 ml frissen desztiUált piridin elegyében. Eh-50 hez áz oldathoz hozzáadjuk 936 g piridinszul­nak 18 ml dimetilformamíddál készült oldatát. A kapott oldatot 17 óra hosszat szobahőmér­sékleten (tartjuk, majd vákuumban bepároljuk. A száraz maradékot (több ízben 15 ml vízzel 55 mossuk, és vákuumban szárítva 395 mg reak­eióterméket kapunk. A kapott nyers oktapep­tidszulfátot feloldjuk 0,1 mólos aimmóniumkar­bonát oldatban, és DEAE-Sephadex A—25 oszh lopon kromatografálva tisztítjuk. Az 1,5 cm 60 átmérőjű és 15 om magas oszlopot összesen 350 ml 0,1 mólos és 350 ml 1,5 vizes amimó­niumkárbonát oldaitból készült lineálisan nö­vekvő koncentrációjú elegyekkel eluáljuk, és 7 ml-es frakciókat gyűjtünk, és ezeket 253 m/*-63 nál észlelhető ultraibolya elnyelésre vizsgáljuk. 2

Next

/
Thumbnails
Contents