162857. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, lassú hatású alfa- és béta-glükopropteidek előállítására mikróba-tartalmú oldatokból vagy szuszpenziókból
13 3. példa: Glükoproteid-frakció előállítása Pneumococcus-kultúrából Az előállítás körülményei azonosak az előző példában leírtakkal azzal a különbséggel, hogy a beoltáskor még 3,5% kiegészítő tápoldatot adunk. A tápoldat összetétele: Kenyérélesztő Desztillált víz 250 g 2000 ml 162857 14 A mikroba-keverék összetétele a következő: Pneumococcus 120 >109 csíra/ml Staphylococcus 80 -109 csíra/ml 5 Streptococcus 100-109 csíra/ml .- Pneumococcus 120-109 csíra/ml Neisseria catarrhalis 80 -109 csíra/ml Klebsiella pneumoniae 120-10 9 csíra/ml 10 Az előállítás menete azonos a 2. példában leírtakkal. Az ily módon előállított aktív frakció mennyisége kb. 8 g. Az élesztö-szuszperiziót 5 percen keresztül forraljuk erős keverés közben, majd még forrón leszűrjük szűrőpapíron keresztül, A szűredékhez 100 ml-ként 40 g glükózt adunk és az oldatot feltöltjük desztillált vízzel 1000 ml-ig. A táptalaj pH-j át pontosan 8-ra állítjuk be, majd az oldatot sterilizáljuk 110 C° hőmérsékleten 1 órán keresztül. A tenyésztési idő kb. 20 óra. A kész tenyészetben ml-ként kb. 120 milliárd csíra van. 4. példa: Glükoproteid-frakció előállítása Streptococcus-tenyészetből A készítés módja azonos a 3. példában leírtakkal. A kultúra tenyésztési ideje 20 óra. A kész tenyészetben ml-ként 100 milliárd csíra van. 5. példa: Glükoproteid-frakció előállítása Staphylococcus-tenyészetekből A táptalaj beoltását ugyanúgy végezzük, ahogy azt a 2. példában leírtuk. A táptalaj pH-ját pontosan 7,2-n tartjuk. A tenyésztési idő kb. 7 óra. A kész tenyészetben ml-ként kb. 80 milliárd csíra van. A tisztítás további műveletei azonosak a 2. példában leírtakkal. 6. példa: Glükoproteid-frakció előállítása Neisseria catarrhalis tenyészetből Az előállítás menete azonos a.2, példában leírtakkal. A táptalajhoz a beoltassál egyidejűleg 3%-os steril ascit-oldatöt adunk. A táptalaj pH-ját 7-re állítjuk be. A tenyésztési idő 25 óra. A kész tenyészetben ml-ként kb. 80 milliárd csíra van. 7. példa: Glükoproteid-frakció előállítása mikrobakultúrák keverékéből 15 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás új, lassú hatású a- és /?-klükoproteidek előállítására mikróbatartalmú oldatokból 20 vagy szuszpenziókból, azzal jellemezve, hogy szilárd vagy folyékony közegben Diplococcus pneumoniae serotype 5 (n° 573), Diplococcus pneumoniae serotype 2 (n° 53 145), Diplococcus pneumoniae serotype 3 (n° 53 146), Haemophilus 25 influenzae serotype B (n° 5494), Klebsiella pneumoniae (n° 52 145), Diplococcus pneumoniae serotype 1 (n° A 6), Diplococcus pneumoniae serotype 8 (n° 574), Streptococcus pyogenes A (n° 561), Streptococcus C (n° A 7), Streptococ-30 cus G (n° 55 120), Neisseria catarrhalis (n° A 152), Staphylococcus aureus (n° 53 156) kultúrát tenyésztünk egy- vagy többféle mikroba-telepből, vagy egy tenyészet különböző típusaiból kiindulva, a mikróbasejteket a telepek teljes 35 kifejlődése után összegyűjtjük, vizes közegben szuszpendáljuk, majd a mikróbasejteket fizikai, enzimes és/vagy kémiai módszerekkel feloldjuk, a sejtmaradványokat a szokásos fizikai műveletekkel elválasztjuk, a tiszta oldatot szá-40 razra pároljuk, a maradékot egy vagy több zsíroldószerrel extraháljuk, az így kapott lipoidmentesített frakciót égy másik, oxigénatomot vagy atomokat tartalmazó oldószerrel másodszor extraháljuk, a lipoidmentesített terméket 45 vizes oldatba visszük, fizikai vagy kémiai módszerekkel fehérjeroentesítjük, a kivált fehérjéket elkülönítjük és a tisztított maradékból vizes közegben oxigéntartalmú oldószerek keverékének hozzáadásával szelektíven kicsapjuk a las-50 sú hatású glükoproteideket és adott esetben a biokémiában szokásos módszerekkel tisztítást végezve izoláljuk a lassú hatású a- és ß-gliikoproteideket, amelyek előnyösen 4--20%, illetve 50—60% össz-hexózt tartalmaznak, és amelyek-55 nek. a dextrán-gél, célszerűen Sephadex G 100 oszlopon mért Ve/Vo moláris térfogataránya — eluálószerként pH 8-as értékű pufferoldatot használva — 1—3 közötti, előnyösen 1—1,2, illetve 2,5—3 közötti érték. (Elsőbbsége: 1970. 60 május 20.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikrobasejtek kémiai feloldását felületaktív anyag, pél-65 dául polietilén-glikol-szorbinsavas észterek és 7
