162446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daganatsejtek szaporodásának szelektív gátlására alkalmas kivonatot tartalmazó készítmény előállítására
162446 3 vizsgálataink adataira támaszkodva (Balázs és Rappay: Acta Biol. Hung., 18, 1967: 371—386: Balázs, Fachet és Stark: Exp. Geront., 5, 1970: 1(>3—170) kiszámítottuk a myeloid elemek sztöchiometrikus viszonyait. A 3 millió csontvelő sejt optimális gátlásához 1 millió differenciáit granulocyta szükséges. A granulocytákban foglalt DCI a csontvelő sejtek Vnci my. prek. közül csak az osztódóképes myeloid prekurzorokat gátolja, A QDCI my. prek. hányados értéke mutatja, hogy az 1 millió differenciált granulocyta hány differenciálatlan myeloid prekurzornak felel meg. GCj^.f 103 > csv 103 2csv 106 (E + L + MKC + PS) + 0,8 "^my. MMC 10:! 2mv -GC 10:i 1.2 ahol: my. prek. GCDCI (E+L+ MKC+PS) Z raj MMC GC : myeloid prekurzorok száma DCI-t tartalmazó peritoneális GC-k száma/mi csontvelősejtek száma/ml erythroid, lymphoid, megakaryocytoid és plazmasejtek száma/103 csontvelőseit : myeloid sejtek összege/10s csontvelősejt : metamyelocyták száma/103 myeloid sejt = granulocyták száma/103 myeloid sejt Dózismegállapítás: A felhasználandó DCI tartalmú differenciált sejtek száma (n) 1,2; ahol n = a rendszerben foglalt osztódóképes prekurzorok A találmányhoz fűződő előnyös hatások: Sejtspecifitás: A granulocyta extraktumok mellett más sejttípusok hatását is szkríneltük (szűrővizsgálatnak vetettük alá). Kitűnt, hogy a proliferáló csontvelősejtek ciklusát csakis a homotyp differenciált sejtek gátolják, aliquot mennyiségű máj, lép, vese, HeLa sejtkivonat nem. Ugyanakkor granuloid DCI nem gátolja más típusú sejtek, pl. l-I0e/ml tenyészfolyadék sejtszámú HeLa kultúrák proíiferációját. Toxicitás: Az extraktum toxikus hatását kizárja, hogy a homotyp inhibitor magasabb koncentrációi, illetve a heterotyp sejtek azonos mennyiségű extraktumai nem fejtettek ki gátló hatást a csont velősejtek mitotikus indexére. Hatás a leukémiás sejtekre: Egészséges patkányok peritoneumából készített DCI hatását daganatos sejtkultúrákon is megvizsgáltuk. Subcutan passzált Shay kloroleukémiás patkányok (2—4 cm átmérőjű bőr alatti tumor, 40—-50% myeloid prekurzor a vérben) csontvelőjét 16 órán át DCI jelenlétében és anélkül tenyésztettük. A kapott értékek: xk x 13,75; = 8,8: s = 7,01. s = 5,23. AD0I 0,0, H = U,^0. n = 40, a különbség erősen szignifikáns, p<0,001. Faj-aspecifitás: Azonos vércsoportú, egészséges humán donorok véréből is készítettünk DCI extraktumot, 3 ill. 2 millió leukocyta/leukémiás patkány 20 csontvelő-kultúra ml. dózisban. A megfelelő MI értékek: a, x= kontro i /,.' b ; x DC] _ 1 m _ == 4,/ c) x oct _ 2m _ = 25 = 6,0 Az a) és b) érték közötti különbség szignifikáns (p<0,01), az a) és c) közötti nem (p>0.1). Következőleg (i) a DCI sejtspecifikus, de nem fajspecifikus; (ii) feltehetőleg az emberi leukémiás sejtek proliferációja is meggátolható DCI adagolásával. In vivo alkalmazhatósága: Az in vitro kísérleteken túlmenően egészséges, 21—28 napos, 35—50 g súlyú hím Wistar patkányokon in vivo vizsgálatokat is végeztünk. A kontroll csoportot 0,5 ml 8,00 g NaCl + 0,20 g KCl 4- 0,20 g CaCl2 + 0,10 g MgCl2 -8H 2 0 4- 0,05 g NaH„PO á -H 2 0 4- 1,00 g glukóz 4- 1,00 g NaHC03 per" 1000 ml desztillált víz összetételű (Tyrode) oldattal, a kísérletieket defibrinált borjúvérből izolált granulocytákból Tyrode-oldattal extrahált DCI-vel kezeltük. Allatonként 2,5-105 —5-I0 6 leukoeyta DCI/g testsúly intraperitoneális adagolását végeztük el. Az állatokat 6 óra elteltével elöltük és femoralis csontvelőjükből, a thymusból, a lépből és a heréből preparátumokat készítettünk, majd regisztráltuk mitotikus indexeiket (MI). Első lépésként a hatásos koncentráció-értéket állapítottuk meg. Az in vitro optimális dózis — korrekciókkal végzett átszámolása alapján, in vivo 1-107 leukocyta/állat = (2,5-10 3 g/testsúly) minimális adagolásával kezdtük meg kísérleteinket. 5-105 , 7,5-10 5 , M0 e , 1,25-10« és 1,5-10« leukoeyta DCI/g testsúly koncentrációk nem csökkentették a kezelt állatok csontvelősejtjeinek Mi-ét. Következő kísérletünkben az adagolt DCI menynyisége 3,75-10* és 11,25-W/g testsúly [ = 150 ill. 450 millió leukoeyta homogenizátuma állatonként] volt. Eredményeinket az 1. táblázatban foglaltuk 30 35 40 45 50 55 60 2
