162334. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rabelomicin és dehidrorabelomicin antibiotikumok előálítására
162334 S. olivaceus S. olivaceus ATCC 21549 IMRU 3335 spóraszín sorozat szürke szürke spóratartó alakja nyílt spirális nyílt spirális spóra felülete sima sima melanoid pigment nincs nincs fonák színe középbarna sötétbarna szén hasznosítás: glukóz + + d-mannit + + l-inozit + + d-xilóz + + l-arabinóz + + 1-ramnóz — + d-fruktóz — + raffinóz — -szacharóz — A ramnóz és a fruktóz hasznosításában mutatkozó különbség csekély, és nem szolgaihat laji megkülönböztet«; _ alapjául. A Streptomyces olivaceus ATCC 21549 által termelt rabelomicin antibiotikum különösen Gram-pozitív baktériumok ellen hatásos. Az antibiotikum termelesere Strep- 2b tomyces olivaceus ATCC 21549-et szobahó'mérséket körül például 25 C*-on süllyesztett aerób körülmények között asszimilálható szénhidrátot és egy asszimilálható szerves nitrogénforrást tartlmazó 5,5-8,0, eló'nyösen 6,4-6,8 pH-ju vizes táptalajon tenyésztünk. A tenyésztés több napig tart, 30 például 96 óra hosszat, és a végén a táptalaj antibiotikumot tartalmaz. A fermentálás befejeztével a fermentlé pH-ját tömény sósavval kb. 6 értékre állítjuk be. és a fermentlét leszűr- g, jük. Az antibiotikumot a micéliumból (vagyis a szűrő lepényből) metanollal extraháljuk. A metanolos oldatot vákuumban bepároljuk, és így vizes szuszpenziót kapunk. A vizes szuszpenziót egyesítjük a fermentlé szüredékével, és a vizes keveréket vízzel telített etilacetáttal extraháljuk. A 40 szerves fázist vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és szirup• sűrűségűre koncentráljuk. További tisztításra a szirupot 3:1:4 térfogatarányú metanol-víz-hexán rendszerrel ellenáramú megosztásnak vetjük alá. A biológiailag aktív frakciókat egyesítjük, és etilacetáttal ismét extraháljuk. Az etilacetátos 45 kivonatot szárazra bepároljuk, és a maradékot DEAE cellulóz oszlopon kromatografálva tovább tisztítjuk, majd kovasavgél lemezen preparatív méretben kromatografáljuk. Végső' tisztításra benzol és metanol elegyébó'l többször átkristályosítjuk. A rabelomicin szerkezetét az I. képlet mutatja. 50 A rabelomicin dehidratálható ásványi savval, például tömény sósavval vagy tömény kénsavval, és így (II) képletű dehidrorabelomicin keletkezik. A rabelomicin észtereket alkot savakkal, például egy savhalogeniddel. iiiintacetilkloriddal, vagy egy savanhid- 55 riddel, mint ecetsavanhidriddel, egy bázis, például piridin jelenlétében kezelve. A rabelomicin aminosavakkal, például glicinnel vagy fenilalaninnal is észtereket alkot. A rabelomicin három acilezhetó' hidroxilcsoportot tartalmaz, és mono-, di- és triésztereket képes alkotni az acilező- 60 szer é^ :i rabelomicin aránvától függőón :i rcukriókeverókhc" Egy egyenérték rabelomicin acilezése esetén monoészterek keveréke, amelyben a két fenolos hidroxilcsoport közül az egyik van acilezve, különíthető el kromotografálással. Egy egyenérték rabelomicinre két egyenérték acilezó'szert hasz- 35 nálva mindkét fenolos hidroxilcsoport acileződik. A rabclomicint három egyenérték acilezőszerrel kezelve a tercier hidroxilcsoport is észterezhető. A túlnyomó reakció azonban dehidratálódás, majd acileződés dehidrorabelomicin triésztereinek keletkezésével. Ezek a triészterek előállíthatók dehid- ?Q rorabelomicinnek acilezőszerekkel való kezelésével is. Bár bármely acilezőszer alkalmazható, előnyös acilezó szerek a legfeljebb 11 szénatomos szénhidrogén-karbonsavak savanhidridjei és savkloridjai. Ilyen savak a megfelelő alkánsavak (például ecetsav és propionsav), alkénsavak, egygyűrűs 75 ariikarbonsavak (például benzoesav) egygyűrűs arilalkánsavak •(például fenilecetsav), cikloalkánkarbonsavak és cikloalkénkarbonsavak. A rabelomicin bázisokkal sókat alkot, például. ha a rabelomicint alkálifémhidroxiddal vagy alkáliföldfémhidroxiddal, mint amilyen a nátriumhidroxid, káliumhidroxid, kalciumhidroxid, báriumhidroxid és magnéziumhidroxid, reagáltatjuk. A kristályos rabelomicin fizikai és kémiai tulajdonságai a következők: Színe:sárga Olvadáspontja: 193 C* (bomlik) Elemi Összetétele:C 67,17, H 4,48, O 28,35%. Az elemi összetétel és nagytelokla^u tomegspektrum alapján empirikus képlete C, ,H,4 O,. Oldhatóság: oldható alkoholban, rfcetonban, kloroformban, oldhatatlan vízben és petroléterben. Ultraibolya abszorpciós szmkep a Kristályos rabelomicin abszorpciós maximumai semleges metanolban vagy 0,02 n metanolos hidrogénkloridban: ^max^m f 228 26 600 267 28 800 433 8 000 Abszorpciós maximumok 0,02 n metanolos nátriumhidroxid oldatban; ^max.nm c 258 26 200 282 (váll) 13 100 325 8 900 507 7-500 Infravörös színkép: a rabelomicin infravörös abszorpció^ színképe 4%-os kloroformos oldatban az 1. ábrán látható. Szignifikáns abszorpciós Návok a következők: cm" cm" cm" 3400 1352 979 2974 1290 960 1700 1259 921 1675 1181 903 1630 1168 867 1602 1141 855 1566 1127 843 1463 1099 828 1448 1074 1375 1057 Optikai forgatás: |ali) =-102±10"(c = 1, kloroformban). NMR spektrum: az NMK spektrumot CDCl,-ban háta roztuk meg Varian T-60 NMR spektrométerrel. Alább megadjuk a kémiai eltolódást egy tetrametilszilán belső standardhoz képest ppm-ben, a vonalak jellegét és a relatív intenzitását :
