162171. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a szérum kalciumtartalom csökkentésére képes hormonszerű szer előállítására

162171 15 16 Az összes frakciók biológiai értékmérése alapján megállapítottuk, hogy a calcitonin-hatásu hatóanyagokat az eluátum az 50-től a 65. frakciójáig terjedő része tartalmazta, ezeket a frakciókat egyesitettük. Az egyesitett frakciókat csökkentett nyomáson bepároltuk, majd liofilizáltuk; 22 mg poralaku, hormonszerü hatóanyagot kaptunk, amelynek hatáseró'ssége 220 MRC E/mg. 8. példa: A kb. 2500 angolnából (Anguilla marmorata) összegyűjtött szivburokhártyákat és a vena cava szövetet magába foglaló, szivhez közeli, a nyelőcső falához kötődő szövet-részt a 3. példában leirthoz hasonló zsirtalanitó és viztelenitő kezelésnek vetettük alá. 200 g szárított terméket kaptunk, amelynek hatáserőssége 100 MRC mE/mg; ezt a száraz terméket 3,36 liter butanol, 1,92 liter piridin, 320 ml ecetsav és 2,40 liter viz elegyében diszpergáltuk, 50 C° hőmérsékleten történő 24 órai keverés utján. Az igy extrahált terméket tartalmazó elegyet leszűrtük és a szürletet csökkentett nyomáson, 50 C° hőmérsékleten bepároltuk. A bepárlási maradékot 400 ml vizben oldottuk és 5000 percenkinti fordulatszámmal centrifugáltuk 10 percig, az oldhatatlan anyagok eltávolítása céljából. A tiszta felüluszó folyadékot liofilizáltuk; ilymódon 5,2 g poralaku termék alakjában kaptuk a nyers hatóanyagot, amelynek hatáserőssége 6,2 MRC JE/mg volt. Az Így kapott 5,2 g nyers hatóanyagtartalmu terméket 150 ml 0,2 n ammóniumacetát-oldatban (pH = 4,7) oldottuk.majd egy "Sephadex G-75" ioncserélő gyantával töltött, 7, 5 x 90 cm méretű oszlopon vezetjük keresztül. Az oszlopot azután ugyanezzel az ammőniumacetát-oldattal eluáljuk 127,5 ml/óra átáramoltatási sebességgel. Az eluátumot 15 ml térfogatú frakciókban gyűjtöttük össze. Mindegyik ilymódon kapott frakcióban mértük a biológiai aktivitást, patkányon, a szokásos módszerrel. A szérum-kalciumtartalmat csökkentő aktivitás csúcsértékeit a205-225. frakcióban találtuk; ezeket egyesitettük és liofilizáltuk. Ilymódon 95 mg hormonszerü, a szérum-kalciumtartalmat csökkentő terméket kaptunk, amelynek aktivitása 105 MRC E/mg volt. 9. példa: 200 angolnát 12 napon át olyan mesterséges tengervízben neveltünk, amelynek sókoncentrációja a valódi tengervizének a fele volt (VANT HOFF-féle mesterséges tengervíz). Az igy nevelt angolnákból kivettük a vena cava a szivhez közeli, a nyelőcső falához kötődött részét, továbbá a szivburokhártyát. A kihámozott nyersanyagot viztelenités céljából 3 órán át 400 ml 10 mg EDTA-t tartalmazó, 5 C°os acetonban áztattuk, és ezt a müveletet megismételtük. Az igy víztelenített terméket zsírtalanítás céljából 1 órán át 300ml5C°-os kloroformban áztattuk, és ezt a műveletet is megismételtük. Ezután még kétszer alkalmaztuk a fenti víztelenítési müveletet, azonban ugy, hogy az aceton menynyisége 300 ml volt. A víztelenített terméket levegőn szárítottuk; 14 kg szárított terméket kaptunk, amelynek hatáserőssége 235 MRC E/mg. 10. példa: 800 angolnát 13 napon át 20 C°-os, 1/3 mólos konyhasóoldatban neveltünk. Az igy nevelt angolnákból ezen idő eltelte után azonnal kivettük a vena cava a szivhez közeli, a nyelőcső falához kötődött részét, továbbá a szivburokhártyát. A kihámozott nyersanyagot a 9. példában leirt módon kezeltük: 68 g szárított terméket kaptunk, melynek hatáserőssége 208 MRC E/g. 11. példa: 50 g a 10. példa szerinti szárított terméket a 6. példában leirt módon kezeltünk; 365 mg poralaku, hormonszerü hatóanyagot kaptunk, melynek hatáserőssége 21,5 MRC E/mg. 12. példa: 250 mg a 11. példa szerinti poralaku terméket a 2. példában leirt módon kezeltünk azonban ugy, hogy 8 ml-es frakciónként kémcsövekben fogtuk fel az eluátumot. Az összes frakciók 277 m^-on mért fényabszorpciója,valamint a biológiai értékmérés eredménye alapján az eluátum 56-tól a 70-ig terjedő frakcióit egyesitettük. Az egyesitett frakciókat liofilizáltuk; 28,5 mg poralaku, a szérum-kalciumtartalmat csökkenteni képes hormonszerü hatóanyagot kaptunk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az emlősök szérum-kalciumtartalmát csökkentő hatású hormonszerü szer előállítására angolnák (Anguilla-faj ok) szekréciós szövetének extrakciója utján, azzal jellemezve, hogy angolnák szivét, főként a szivburok hártyát és/vagy a vena cava szivhez közeli, a nyelőcső falához kötődött részét magába foglaló szövetet, vagy ezekből készített zsírtalanított, szárított terméket hidrofil szerves oldószerektől és vizből álló oldószereleggyel, vagy híg savval, vagy vízzel extraháljuk, a kapott kivonatból vagy a kivonat szilárd részeinek eltávolítása utján kapott folyadékból a szenynyező fehérjéket eltávolítjuk és kivánt esetben az igy kapott oldatot további tisztítási és/vagy szárítási műveleteknek vetjük alá. (Elsőbbség: 1971. március 10.) 2. Eljárás az emlősök szőrum-kalciumtartalmát csökkentő hatású hormonszerü szer előállítására angolnák (Anguilla-fajok) szekréciós szövetének extrakciója utján, azzal jellemezve, hogy az angolnáknak a vena cava szivhez közeli, a nyelőcső falához kötődött részét magába foglaló szövetét vagy az ebből készített zsírtalanított, szárított ter-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8