162136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz tisztítására

MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1971. III. 15. <RO—608) Franciaországi elsőbbsége: 1970. III. 23. (70 10 333) Közzététel napja: 1972. VII. 28. Megjelent: 1974. X. 31. 162136 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02 C 07 g 7/028 Feltalálók: Dr. Penasse Lucien vegyészmérnök, iPárizs, iBarthelemy Pierre vegyészmérnök, Clichy Sous Bois, Hasbiss Denise kutatómérnök, Párizs, Franciaország Tulajdonos: Roussel Uclaf cég, Párizs, Franciaország Eljárás L-aszparagináz tisztítására A találmány tárgya eljárás enzimek tisztítására. A találmány tárgya közelebbről eljárás aszparagináz-típusú enzimek, pontosabban L-aszparagináz tisztítására. 5 Az Escherichia coli-ból és a Serratia marcescens-ből elkülönített L-aszparagináz antineopláziás aktivitását MASCHBURN és WRISTON ismertették [Arch. Biochem. Biophys, 105, 451 (1964)]. 10 ROBERTS és munkatársai tárgyalják alkoholok mint kicsapó ágensek és a pH szerepét aszparagináz tisztításával kapcsolatban [J. Bacteriol, 95, 2118 (1968)]. Megállapítják, hogy a víz:- 15 zel jól elegyedő alkoholok felhasználása lehetővé teszi az enzim kicsapását denaturálás nélkül, aminek révén elkerülhetők az oldatbavitelkor fellépő Utólagos nehézségek. Megállapítják továbbá, hogy ha a pH-t végül meghatározott ér- 20 tékre állítják be, az izoelektromos pont közelében lehet dolgozni. Ismeretes, hogy a Serratia marcescens-ből és az Escherichia coli-ból elkülönített L-Jaszparagináz erős tumorgátló hatással rendelkezik, 25 Ismeretes továbbá, hogy a kívánt enzimatikus hatással rendelkező L-aszparaginázt olyan tisztaságban kell előállítani, hogy másodlagos hatások — így szanzibilizáció vagy allergianélküli kezelést biztosíthassunk. 30 Az L-aszparagináz tisztítására már ismeretesek eljárások. A szóbanforgó enzimet például oszlopkromatográfiával vagy ásványi sóval — például ammóniumszulfáttal —» történő frakcionált kicsapással tisztíthatjuk meg. Ezek az eljárások azonban ipari méretekben csak nehezen alkalmazhatók. Sőt, az ásványi sóik használatának az a hátránya, hogy a termékből a só nyomait el kell távolítani. Ehhez külön műveletre — dialízisre — van szükség. Az 1 585 246 lajstromszámú francia szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint az L-aszparaginázt úgy tisztíthatjuk meg, hogy az enzim oldatát 10 percre 55 C° hőmérsékletre melegítjük fel. Az eljárás során a termékben jelenlevő proteinek legnagyobb része denaturálódiJk, s a denaturált proteineket könnyen kicsaphatjuk, majd eltávolíthatjuk az oldatból. Ámbár az eljárás — egyszerű volta következtében — előnyösnek tűnik, ilyen módon mégsem állítható elő a tiszta L-aszparagináz, mivel a közeg egyenletes hőmérséklete csak nehezen biztosítható. Találmányunk tárgya olyan eljárás aszparagináz^típusú enzimek, közelebbről L-aszparagináz tisztítására, amely nem rendelkezik a fenti hátrányokkal. A találmány szerinti eljárás értelmében úgy tisztítunk Escherichia coli-ból vagy Serratia 162136