162135. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a polimixinekből származó ciklusos polipeptidek előállítására
162135 15 16 23. példa 90 mg ciklo-[Na-(N-6-a-mjetil-ok(tan(OÍl-N)/-benziloxiJkarbonil-L-oc,y-diaminobutiril-L-treonil-Ny-benziloxikarbonil-L-a^-diaininobutiril)-N)'-L-a,}'-dil aminobu i tiril-N}'-(N-oxido-3-piridil-metoxifearbonil)-L-a,}'-diami| nobutiril-D-leucil-L-leucil-Ny-(N-oxido-3-piridil-metoxikarbonil)-L-a,y-diaminobutMl-N}>-(N-oxido-3-piridil-metoxikarbonil)-L-a,y-diaminoibu'tiril-L-treoinil]-nak 7 ml metanol és 1 ml n sósav elegyével készült oldatához 100 mg 3,15% palládiumot tartalmazó palládiumszenet adunk, és 16 óra hosszat lassú hidrogénáramot bocsátunk át az oldaton. Szűrés és a szüredéknek 25 torr nyomáson 50 C°-on való szárazra párlása után a maradékot 1 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 40 g Sephadex LH 20 ioncserélő műgyantából készült oszlopon (az oszlop átmérője 14 mm, magassága 1,7 m) kroimatografáljuk. Metanollal eluálunk, és 3 ml-es frakciókat gyűjtünk. A 33—35. frakciókat egyesítjük, 10 ml desztillált vízzel hígítjuk, és az oldatot liofiliizáljuk. Ily módon 32 mg kolisztin A-pentahidrokloridot kapunk. Rf = 0,29 (kovasavgélen, 50:20:6:24 térfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). Az így kapott kolisztin azonos a természetes kolisztin A-val. Szabadalmi igénypont: Eljárás a polimixinekből származó, egyetlen szabad aminfunkcióval rendelkező I általános képletű új védett ciklusos polipeptidék előállítására — ebben a képletben Y—Z egy D-Leu-Thr, D-Phe-Leu, D-Leu-Leu vagy D-Leu-Ileu képletű csoportot és 5 G egy II általános képletű csoportot jelent (ez utóbbi képletben Py adott esetben metilcsoporttal szubsztituált piridil- vagy N-oxidopiridilcsoportot jelent) — azzal jellemezve, hogy egy IV általános képletű 10 védett polimixint — ebben a képletben K n-oktanoil-, L-6-metiloktanoil- vagy 6-metilheptanoil-csoportot és vagy Y—Z D-Leu-Thr csoportot és X D-a^-diaminobutiril- vagy D-Ser csoportot, 15 vagy Y—Z D-Phe-Leu vagy D-Leu-Leu csoportot és X a,y-diaminofoutirilcsopartot jelent, vagy K L-6-metil-oiktanoil- vagy 6-metil-heptanoil-20 csoportot, Y—Z D-Leu-Ileu csoportot és X a,y-diaminobutirilcsoportot jelent, és ha X L — vagy D-a,y-diaminobutirilcsoportot jelent, akkor annak j/-aminocsoport-25 ja egy II általános képletű csoporttal van szubsztituálva (az utóbbi képletben Py a fenti jelentésű), és más megjelölés híján az aminocsoportok L-konfigurációjúak—, 30 szelektíven enzimatikusan hidrolizálunk Bacillus subtilis által termelt exocelluláris proteázok, előnyösen szubtilizin, nagarsz, pronáz, kolisztináz, alkanáz vagy a B. substilis GLAXO 417, B. subtilis ATCC 9524 és B. subtilis THE 4 proteá-35 zai segítségével. 1 rajz. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 8 74.6377/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató
