162135. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a polimixinekből származó ciklusos polipeptidek előállítására
162135 7 ' Ö összetétel: számított: N -* O 7,79% talált: N-* O 7,60% 8. példa 2,17 g polimixin B 145 ml dimetilfomaamiddal készült szuszpenziójához hozzáadunk 3,18 g vegyes (N-oxido-3-piridü-metil)-(p-nitrofenil)-karbonátot. 60 C°-on való 24 órai és 20 C°-on való 65 óra keverés után az oldhatatlan részt szűréssel elválasztjuk. A szűredéket 0,3 torr nyomáson 60 C°-on szárazra pároljuk. A maradékot 7 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 38 mm átmérőjű és 1,80 m magas Sephadex LH 20 oszlopon kromatografáljuk. Metanollal eluálunk 7 ml-es frakciókat gyűjtve. A 130—170. frakciókat egyesítjük, és 20 torr nyomáson 50 C°-on szárazra pároljuk. Ily módon 3,2 g peinta-N-(N-oxido-3-piridil-metoxikarbonil)-polimixin-B-t kapunk. Rf = 0,30 (kovasavgélen; 50:20:6:24 terfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). 9. példa 5,45 g 3-hidroximetil-piridinnek 3,95 g piridin és 45 ml metilénklorid elegyével készült oldatához 20 perc alatt, a reakciókeverék hőmérsékletét 35 C'° alatt tartva, hozzécsepegtetjük 13 g 2,4,5-triklórfienil-klórformiátnak 20 ml metilénkloriddal készült oldatát. A hozzáadás befejezése után néhány perccel sárga csapadék jelenik meg. A reakciókeverék keverését 20 C°-on 20 óra hosszat folytatjuk. Ezután hozzáadunk 20 ml desztillált vizet. A csapadék feloldódik. A szerves fázist elválasztjuk, majd 2 ízben 25 ml desztillált vízzel, 25 ml 5%-OiS nátriumhidrogénkarbonát oldattal és 25 ml telített nátriumklorid oldattal mossuk. A szerves oldatot nátriumszulfáton megszárítjuk, majd 20 torr nyomáson 50 C°-on bepároljuk. A szilárd maradékot 30 ml forrásban levő metanolban oldjuk, és az oldatot 20 C°-on 1 óra hosszat állni hagyjuk. A kivált csapadékot szűrőre visszük, 30 ml metanollal mossuk, és 0,3 torr nyomáson 20 C°-on megszárítjuk. 7,8 g vegyes (3-piridil-metil)-(2,4,5-triklór-fenil)-karbonátot kapunk. Olvadáspontja 95 C° (Kofler-blokkon). Összetétel: számított: C 46,95%, H 2,42%, N 4,21%, Cl 31,98% ; talált: C 47,69'%, H 2,8%, N 4,11%, Cl 21,41% 10. példa 5 g vegyes (3~piridil-metil)-(2,4,5Htriklór-fenil)-karbonátnak (készül a 9. példa szerint) 80 ml kloroformmal készült oldatához hozzáadunk 3,3 g p-nitroperbenzoesavat. 20 C°-on való 16 órai keverés után a képződött csapadékot szűréssel elválasztjuk, és 20 ml kloroformmal mossuk. Az egyesített szervés oldatokat 50 C°-on 13 torr nyomáson 50 ml-re koncentráljuk, a koncentrátumot 10 percig 15%-os vizes nátriumkarbonát oldattal kezeljük. A vizes fázist elválasztjuk, és 20 ml kloroformmal mossuk; a szerves fázisokat egyesítjük, és 20 ml 15%-os nátriumkarbonát oldattal, 20 ml desztillált vízzel és 20 ml telített nátriumklorid oldattal mossuk. A szerves oldatot nátriumszulfáton megszárítjuk, és 50 C°-on 13 torr nyomáson bepároljuk. Ily módon 4,2 g vegyes (N-oxido-3-piridil-metil)-(2, 4,5-triklór-fenil)-karbonátot kapunk 169 C° olvadásponttal (Kofler-blokkon). — Egy metanolból átkristályosított minta 171 C°-on olvad (Kofler-bloklkon). 11. példa 1,169 g kolisztinnek 80 ml dimetilformamiddal készült szuszpenziójához hozzáadunk 2,1 g (N-oxido~3-piridil-metil)-(2,4,5-trilklór-ifenil)-karbonátot. 44 óra 50 C0 -on való keverés után az oldhatatlan részt szűrőn elválasztjuk. A szűredéket 0,3 torr nyomáson 60 C°-on bepároljuk, az olajos maradékhoz 60 ml étert adunk. Kristályos termék jelenik meg, ezt szűréssel elválasztjuk, 20 ml éterrel mossuk és 20 C°-on 0,3 torr nyomáson megszárítjuk. így 1,5 g penta-N-(N-oxido-3-piridil-metoxikarbonil)Jkolisztint kapunk; ez azonos a 7. példa termékével. Rf = 0,32 (kovasavgélen; n-butanol-piridin-ecetsav-víz 50:20:6:24 térfogatarányú rendszerben). Összetétel: számított: C 54,90%, H 6,54%, N 15,28% talált: C 55,31%, H 6,8%, N 14,90% 12. példa 4,36 g 4-hidroximetil-piridinnek 3,16 g piridin 50 és 35 ml metilénklorid elegyével készült oldatához a reakciókeverék hőmérsékletét 0 C°-on tartva hozzácsepegtetjük 8,06 g p-nitrofenilklórformiátnak 40 ml metilénkloriddal készült oldatát. A hozzáadás befejeztével a reakcióke-55 véreket még 18 óra hosszat 0 C°-on keverjük. Ezután 2 ízben 20 ml vízzel, 2 ízben 20 ml 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát oldattal és 2 íz^ ben 20 ml telített vizes nátriumklorid oldattal mossuk. A szerves oldatot 30 C°-on 15 torr nyo-60 máson szárazra pároljuk. A visszamaradt olajhoz 600 ml étert adunk, az oldhatatlan részt szűréssel eltávolítjuk. A szűredéket 30 torr nyomáson 20 C°-on szárazra párolva 4,1 g vegyes (4--piridil-metil)-p-nitrofenil-karbonátot kapunk 65 83 C° olvadásponttal (Kofler-blokkon). 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Összetétel: 20 számított: C 44,79%, H 2,31%, N 4,02%, Cl 30,51% talált: C 44,9%, H 2,6%, N 3,75%, Cl 30,6% 4
