162040. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ureidofeniltiokarbamidok előállítására, valamint az azokat tartalmazó fungicidek
5 162041 6 tetraiímaleoilj-kallifcrein-teipszin-inihibitor is képződik. Sephadex G—150 oszlopon gél-szűréssel végzett firakcionálás után a reakció-terimék 300—-500 y keverékét cellulózacetát fóliára öntjük, melyet 0,05 mólos íborát-pufferrel (pH 8,0) , átitattunk, Az elektraferograim futási ideje 6 V/cm feszültségnél 1 óra. Két sávot kapunk, melyet a természetes kallikrein-tripszin-inlhibitoir futási-távolságaihoz viszonyítva és 1,0-nak véve, a tetra(imaleoil)^kallikrein-triipszin-inihibitorra 0,i56 és a tri(imaleoil)-kallikrein-tripszin-inhibitorra 0,64 futási távolságot kapunk. Preparatív elektroforézissel, pl. poliakrilamiid-géllel, mint hordozóanyaggal a kallikrein-trípszin-inhibitor mindkét származéka a legjobb eredménnyel állítható elő. Termelés: a felhasznált természetes kallikrem-tripszin-inhiibitor mindkét származéka a legjobb eredménnyel állítható elő. Termelés: a felhasznált természetes kallikrein-tripszin-inhilbitor (mennyiségére vonatkoztatva a liotfilizált anyag termelése 88%-os, fajlagos aktivitása 3,3 IE/mg. A tetra- és a tri(maleoil)-kallikrein-tripszin-inhibitor viszonya 2/3 : 1/3. 3. példa: 200 mg kallikrein-tripszin-inhibitort és 715 mg tripszint 50 iml jéggel hűtött puffer oldatban oldunk és az 1. példában leírt módon a kallikrein-tripszin-inlhibitor-itripszin-ikompiexet állítunk elő. Az így kapott oldathoz 2 g borostyánkősavanhidiridet négy részletben hozzáadva tetra(szukcinil)-kallikrein-tripszin-inhibitort kapunk. A módosított tripszin amimóniumszulfáttal végzett kiicsaipás után a csapadékot szűrjük és a szűrletet 8 n nátriumhidroxiddal pH 6,5-Hre állítjuk be. Az oldatot 0,01 mólos ecetsavval beállítjuk és Sephadex G—50 oszlopra öntjük. Az eluáló szer 0,01 mólos ecetsav. A tetrai(szjukcinil)-kallikrein7-tripszininhiibátort tartalmazó frakciót liofilizáljuk. Termelés: a felhasznált természetes kallikrein-triipszin-iinlhibitoir mennyiségére vonatkoztatva (több kísérlet szerint) a liofilizált tetra(szufccmil)-'toallikirem-tópszin-inhiibátor termelése 80—190%, fajlagos aktivitása 3,3—3,7 IE/mg. 4. példa: 200 mg kallikrein-tripszin-inhibitort az 1. példában megadott eljárás szerint 715 mg tripszinnel kallikrem-tripszin-inhiibitor-tripszin-koimiplex oldattá alakítjuk. A komplex oldatát négy részletben hozzáadott, összesen 2 g acetilmeiíkaptdborostyánkősavanihidriddel reagáltatjuk, majd az így kapott tetra-, tri-, dies mono^acetilmerkaptoszukcinilj-jkallikrein-tripszin-inihibitor keverékét az ismert módon elektroforézissel komponenseire választjuk szét. Termelés: a felhasznált természetes kallikireiin-tripszin-inhibitor mennyiségére vonatkoztatva a liofilizált anyag termelése 80%, fajlagos aktivitása 3,3—13,7 IE/mg. 5. példa: 10 50 mg kallikrein-tripszin-inhibitort és 188 mg tripszint az .1. példában megadott módon reagáltatva, a kallikreki-tripszin-mhitoitor-tripszin-komplexet állítjuk elő. A komplex oldatához négy részletben összesen 2 g karíboxi-15 metilmerkapto'boirostyánkősavanhidiridet adunk. Az adagolás befejezése után kanbaímidot adunk az elegyhez és 2 n sósavval pH 2,0^ra savanyítjuk, majd triklóireoetsarvval a reakcióelegy végkoncentrációját 3!%-ra állítjuk ibe. A kicsa-20 pódó módosított tripszint szűrjük, és a szürletet 8 n nátriumhidroxiddal pH 6,5-re állítjuk ibe. Az oldatot ezután Sephadex G—50 oszlopon engedjük át, melyet előzőleg 0,01 mólos ecetsavval beállítottunk, majd korma tográfál-25 juk és a módosított kallikrein—tripszifn-inhiibitort a 2. példában leírt módszer szerint cellulózaioetát-tfólián végzett elektroforézissel a tet-ra(karboximetilmerkaptoszukcinil)-kallik;rein-tripszm-inhibitort és . trii(kariboxiimetilmer-30 kaptoszuk)cinil)j kallikren-tri'pszin-iinihibitort elválasztjuk. Termelés: a felhasznált természetes kallikrein-tripszin-inhilbitar mennyiségére vonatkoz-35 tatwa a liofilizált tetra- és trJ|(karboximetilmer-kaptosaukcinil)-kallikrein-tripszin-inhibitor termelése '65%, fajlagos aktivitása 3,3—3,7 IE/mg. S. példa: 50 mg természetes kallikrein-tripszin-inhibi-45 tor, 190 mg tripszin és 16 ml 0,1 mólos nátriumhidrogénkaribonát-puffer oldatát (pH 8,5), 7,5 ml acetoniban jól elkevert 50 mg 1-dimetilamiinonaftalin-15-szulfonilkloriddal 18 óra hosszat 20 °C-on reagáltatunk. A reakcióele-50 gyet ezután 2 n sósavval pH 2,0-re savanyítjuk és triklórecetsav hozzáadásával a végkoncentrációt 3%^ra állítjuk ibe. Rövid ideig tartó állás után a módosított tripszint szűrjük, a szűrletet hígított hangyasavval pH 2-re állít-55 juk be és Sephadex G—60 oszlopon engedjük át. Hangyasavval (pH 2,0) eluáljuk és az l-dinietüanamonaftalinH5-szul'fonil-kallikrein-tripszin-inhibitort tartalmazó frakciókat liofilizáljuk. 60 Termelés: a felhasznált természetes kallikrein-tripszin-inlhilbitor mennyiségére vonatkoztatva a liofilizált poli(il'-'dimetilaiminonaftalin-5--szuMonil)-íkallikrein-tripszin-inhibitor terme-65 lése 35%, fajlagos aktivitása 3,3—3,7 IE/mg. 3
