161921. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-)-cisz-1,2-epoxipropilfoszfonsav előállítására

161921 3. példa: Egy másik kísérletben, amelyet az 1. példában leírt eljárás szerint hajtottunk végre, a Streptomyces fradiae NRRL 13—3359-t 500 /tg/ml acetil-(-(-)-cisztein hozzáadásával, illetve enélkül készített táptalajokon növesztettük az alábbi eredményekkel: Antibiotikum-tartalom, /t/ml Adagolás 0 500 /«g/ml acetil-(-|-)-cisztein 500 yug/ml (+)-cisztein.HCl 1. kísérlet 11,0 17,8 14,5 Antibiotikum-tartalom. i/tg/ml A kísérlet száma 1 2 Adagolás 0 11,0 12,8 500 /íg/ml glutation 14,4 16,2 500 /ig/ml (+)--cisztein.HCl — 24,1 6. példa: Egy további kísérletben, amelyet az 5. példában leírt módon hajtottunk végre acetilcisztein és {-|-)Hcisztein.iHCl alkalmazásával, a következő eredményeket kaptuk: 4. példa: Egy további kísérletben, amelyet az 1. példában leírt módon hiajtottumik végre, a Streptomyces fradiae NRRL B—3359-t redukált glutationt tartalmazó illetve enélkül készített táptalajokon tenyésztettük a következő eredményekkel: Hasonló eredményeket kaptunk, amikor S. fradiae NRRL 13—3359 helyett a Streptomyces fradiae más (—)cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav termelő törzsét (például NRRL 3358, 3359 és 3360), Streptomyces viridochromogenest (például NRRL 3413, 3414, 3415, 3416 és 3427) vagy a Streptomyces wedmorensis NRRL 3426-ot használjuk. 5. példa: 10 15 20 25 30 35 40 45 Antibiotikum-tartalom. /tg/ml Adagolás 0 13,1 500 /ig/jnl acetilcisztein 24,6 .500 t«g/ml (+)HCÍSZ-tein.HCl 16,5 Egy másik kísérletben, amelyet az 1. példában leírt módon hajtottunk végre azzal a különbséggel, hogy mind az inokulum-, mind a termelő táptalajhoz 0,1% mononátriumgluta- 50 mátot adtunk, a Streptomyces fradiae NRRL B—3359-t olyan táptalajokon tenyésztettük, amelyek i(+)-J

cisztein.HCl-t és (± )4iamociszteint tartalmazzák, illetve ezek nélkül készültek, a következő eredményekkel: 55 60 65 Antibiotikum-ta rtaloir ./*g/ml A kísérlet sorszáma 1 2 3 Adagolás 0 22,7 16,9 25,8 5O0 /*g/iml I(+)HCÍSZ-tein.HGl 27,8 25,9 500 ^g/ml i(±)-ihomocisztein 22,3 31,7 A találmány szerinti eljárással a fermentlevekben előállított antibiotikum, a (—)cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav számos eljárással kinyerhető. Egy ilyen eljárás szerint az antibiotikumot anioncserélőgyantán adszorbeáltatjuk, például olyan gyantákon, amelyek kvatemer ammónium-cserélőket, vagy egy stirol-divinilbenzol polimer mátrixhoz kötődő polialkilamincsoportokat tartalmaznak. Az adszorbeált antibiotikumot sók, például ammóniumklorid, nátriumklorid, nátriumacetát stb. vizes vagy vizes alkoholos oldatával könnyen leoldhatjuk a gyanta-adszorbeátumról. Az így kapott eluátumot szükség esetén más tisztítási eljárásokkal tovább tisztíthatjuk. így az eluátum egy poliakrilamid gél-ágyon való átvezetéssel tisztítható, amelynek pórusnagysága lehetővé teszi 200—2000 közöti molekulasúlyú anyagok frakcionálását. Az antibiotikum tisztítása végezhető úgy is, hogy a szennyezett antibiotikum-oldatot stirol-divinilbenzol polimer mátrixhoz kapcsolt, szulfonsav-cserélő csoport magvú erősen savas kationcserélő gyantán vezetjük át és a gyantát vízzel eluáljuk. Egy másik megoldás szerint az antibiotikum alumíniumon való adszorpcióval tisztítható; erre a tisztításra bázissal vagy savval mosott alumínium egyaránt alkalmas. Az adszorbeált antibiotikum legegyszerűbben körülbelül pH 11,2 vizes vagy vizes-alkoholos ammóniumhidroxid-oldattal eluálható; az eluátumot frakcionáltan fogjuk fel. A 833A antibiotikum ammónium-sóját tartalmazó szennyezett szilárd frakciók tisztítása ugyancsak úgy hajtható végre, hogy ezt az anyagot metanolban oldjuk, azonos térfogatú n-butanolt adunk hozzá, ledesztilláljuk a metanolt, kiszűrjük a butanolban oldhatatlan anyagot és .égy olyan butanolos oldatot kapunk, ämely ä fokozott tisztaságú antibiotikum ammónium-sóját tartalmazza. »Az ammónium-sót ezután szilárd alakban nyerhetjük ki a butanolos oldat csökkentett nyomáson való szárazrapárolásával. Egy másik megoldás szerint az ammónium-só vízzel extrahálható a butanolos oldatból. Így az ammónium-só vizes oldatát kapjuk. Az antibiotikum kalcium-sóját úgy állítjuk elő, hogy az ammónium-só vizes oldatához kalciumhidroxidot 4